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粗茎鳞毛蕨(Dryopteris crassirhizoma Nakai.)鳞毛蕨科,大型草本,春季新叶萌发早,自然生长在林下,适宜开发用作林下地被,而粗茎鳞毛蕨的自然繁殖力很弱,生态环境在近年又受到严重干扰甚至破坏,其分布区正逐年缩小。因此,研究粗茎鳞毛蕨人工繁殖,既是保护自然资源的有效措施,也是顺应市场、开发利用的必要手段。本研究主要结果包括以下三个方面:
1、粗茎鳞毛蕨孢子常规繁殖技术的研究结果表明:储藏三年的粗茎鳞毛蕨孢子依然能够保持80％的高萌发率;对四种常规基质的研究表明,混合基质(河沙:草炭=1∶1)为粗茎鳞毛蕨孢子萌发和生长的最佳基质;光照强度在18-90μmol· m-2·s-1范围,对孢子萌发的影响不显著,但是低于18μmol· m-2·s-1的光照会导致原叶体生长发育缓慢;离心处理在转速14000r/min,处理时间30min以下对孢子萌发以及后期发育影响不显著;整个孢子常规繁殖周期为65d左右。
2、建立了粗茎鳞毛蕨无菌孢子繁殖体系:(1)孢子接种:采用浓度为1％的NaClO溶液对粗茎鳞毛蕨孢子消毒处理10-20min,消毒洗涤分离时采用14000r/min离心处理5min。(2)孢子萌发:将粗茎鳞毛蕨孢子以50个/cm2密度接种在固体改良knops培养基上(蔗糖浓度3％,琼脂0.7％,pH6.0)置于25℃环境中,经24h黑暗预处理之后置于36μmol· m-2·s-1红光条件下,培养到20d左右孢子萌发,继续培养到35d,孢子基本发育形成原叶体。(3)原叶体发育增殖以及原叶体受精形成幼孢子体:将粗茎鳞毛蕨原叶体接种至液体改良knops培养基(蔗糖浓度4％,pH6.0),弱光,温度25℃,摇床转速120r/min,培养到60d后,幼孢子体苗形成。(4)幼孢子体炼苗移栽:将上述得到的幼孢子体接种到固体改良knops培养基上,继代2-3次后,开盖炼苗移栽。
3、建立了粗茎鳞毛蕨愈伤繁殖体系:(1)愈伤组织诱导:取原叶体团接种到液体改良knops培养基上(蔗糖浓度3％, pH6.0),KT、2,4-D浓度均为0.5mg/L,温度25℃,弱光,摇床转速120r/min.(2) GGB诱导:将上述诱导产生的愈伤颗粒接种到液体改良knop s+6-BA1.0 mg/L+NaH2PO4500 mg/L上,蔗糖浓度3％,pH6.0,温度25℃,弱光,摇床转速120r/min,每隔10d继代1次,培养25d形成绿色球状体,即GGB。(3)孢子体苗诱导:将上述诱导产生的GGB接种到去激素的固体改良knops培养基上,蔗糖浓度3％,pH6.0,温度25℃,培养25d左右产生幼孢子体苗。(4)幼孢子体炼苗移栽:将上述得到的幼孢子体接种到固体改良knops培养基上,继代2-3次后,开盖炼苗移栽。