壮药枫荷桂抗类风湿性关节炎的功效评价、作用机制及药效物质基础研究

来源 :江西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cosmos_lin
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目的:验证壮药枫荷桂抗类风湿性关节炎的功效评价、筛选其抗类风湿性关节炎的活性部位,并探究其抗类风湿性关节炎作用机制及药效物质基础。方法:(1)以牛II型胶原与弗氏不完全佐剂建立大鼠类风湿性关节炎模型,观察枫荷桂总提取物对类风湿性关节炎模型大鼠的足肿胀度、关节炎指数的变化,检测大鼠血清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和类风湿性因子(RF)的含量,观察滑膜组织形态及病理组织的改变,验证枫荷桂治疗类风湿性关节炎的作用。(2)继续以牛II型胶原与弗氏不完全佐剂建立大鼠类风湿性关节炎模型,观察枫荷桂各部位对类风湿性关节炎模型大鼠的足肿胀度、关节炎指数的变化,检测大鼠血清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和类风湿性因子(RF)的含量,观察滑膜组织形态及病理组织的改变,筛选出枫荷桂抗类风湿性关节炎活性部位。并利用Western blot法探究枫荷桂对类风湿性关节炎大鼠滑膜组织中相关炎症通路蛋白TLR2、TLR4、NF-κB、Myd88表达的影响,并探讨枫荷桂抗类风湿性关节炎的作用机制。(3)利用液质联用技术,结合课题组前期建立的枫荷桂化合物质谱数据库和Mass Bank,Chemspider等数据库,对大鼠口服枫荷桂乙酸乙酯部位后的血清进行分析鉴定。研究结果:(1)枫荷桂抗类风湿性关节炎作用的验证:实验结果显示,与模型组相比,枫荷桂提取物能显著降低CIA大鼠足肿胀度和关节炎指数;能显著降低血清中炎症因子中大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)、大鼠白细胞介素-6(IL-6)、大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)和大鼠类风湿性因子(RF)水平;大鼠滑膜病理切片结果显示,枫荷桂提取物可改善模型组大鼠滑膜的病理变化,减缓滑膜增生,减少炎性细胞浸润。(2)枫荷桂抗类风湿性关节炎作用的活性部位筛选及作用机制研究:实验结果表明,与模型组相比,枫荷桂乙酸乙酯部位能显著降低CIA大鼠足肿胀度和关节炎指数;能显著降低血清中炎症因子大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)、大鼠白细胞介素-6(IL-6)、大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)和大鼠类风湿性因子(RF)的水平;大鼠滑膜病理切片结果显示,枫荷桂乙酸乙酯部位可改善模型大鼠滑膜病理变化,减少炎性细胞浸润。滑膜组织中相关炎症蛋白的实验结果表明,与模型组相比,壮药枫荷桂乙酸乙酯高剂量组能显著降低滑膜组织中相关炎症蛋白TLR2、TLR4、NF-κB、Myd88的表达。(3)枫荷桂活性部位抗类风湿性关节炎物质基础研究:实验结果表明:在负离子模式下,对大鼠口服枫荷桂乙酸乙酯部位的含药血清进行分析,最终鉴定和推测了枫荷桂乙酸乙酯部位入血成分:原型成分15个,其中8个为黄酮类成分,6个为二苯乙烯类,1个酚酸类成分;代谢成分17个,其中11个为二苯乙烯类代谢产物,6个为黄酮类代谢产物。研究结论:(1)枫荷桂可以缓解类风湿性关节炎大鼠的关节炎症症状,且枫荷桂乙酸乙酯部位为枫荷桂抗类风湿性关节炎的活性部位;(2)枫荷桂能缓解CIA大鼠的关节炎症症状,与抑制TLR4/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关;(3)枫荷桂乙酸乙酯部位中的潜在抗RA活性成分为:isorhapontin、phloretin、catechin、oxyresveratrol、andalasin A、morin、afzelechin及它们的代谢产物。
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