论文部分内容阅读
目的：建立大鼠烟曲霉菌性角膜炎动物模型。探讨烟曲霉菌感染角膜组织后角膜局部的免疫病理机制。方法：刮除大鼠角膜上皮层，以右眼为实验眼，在角膜面与自制角膜接触镜之间直接涂抹培养的菌落或滴加不同浓度的孢子悬液：以左眼为对照眼，在角膜面与自制角膜接触镜之间滴加无菌生理盐水。观察病程，行角膜病理切片HE和PAS染色，比较得出较好的建模方法，对病程进行合理分期。采用该方法建立实验早期、中期、后期组及对照组。实验组分别于接种后2天(d)、6d、2周(W)时处死取标本，对照组于接种后3d处死取标本。采用免疫组织化学方法观察角膜组织中中性粒细胞、LC、T淋巴细胞(CD3~+T)及其亚群CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞、B淋巴细胞的动态变化。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，检测IL-6、IL-10、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在不同病程角膜组织中的表达。结果：菌落直接涂抹法能稳定且简便的建立大鼠烟曲霉菌性角膜炎动物模型。在大鼠烟曲霉菌性角膜炎早期(接种后1-3d)，见角膜水肿、角膜白色溃疡浸润灶形成，PAS染色见菌丝平行或斜形生长于角膜基质前1／3层。免疫组化见多量中性粒细胞及少量CD3~+T、CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞和LC浸润，未检测到B淋巴细胞。在中期(接种后4-7d)，角膜黄白溃疡、干燥致密。PAS染色见菌丝溃疡灶位于角膜基质前1／3-2／3层，周围被大量炎症细胞包围，中性粒细胞浸润达高峰。免疫组化见T淋巴细胞浸润增加，其中CD4~+T淋巴细胞多于CD8~+T淋巴细胞。LC亦增多，B淋巴细胞开始出现。在晚期(接种后9-14d)，角膜白斑及大量新生血管长入。病理切片见肉芽肿样改变，PAS染色未见菌丝或孢子。免疫组化见中性粒细胞数目有所减少，T淋巴细胞浸润达高峰，CD4~+T淋巴细胞亦多于CD8~+T淋巴细胞，B淋巴细胞少量表达。对照组角膜IL-6、IL-10、ICAM-1几乎不表达或极微量表达。在实验组角膜中，IL-6早期即大量表达，中期炎症反应高峰时亦达高峰，以后逐渐下降；IL-10在早期表达最高以后逐渐下降；ICAM-1早期开始表达中期达高峰以后逐渐下降。IL-6在晚期组与对照组间无差别(p＞0.05)，余早期组、中期组、对照组间均有统计学意义(p＜0.01)。IL-10、ICAM-1在实验对照组与实验组早、中、晚期组四组间均有统计学意义(p＜0.01)。结论：(1)菌落直接涂抹法是建立大鼠烟曲霉菌性角膜炎动物模型较好的方法。(2)大鼠烟曲霉菌性角膜炎病程早中期可能是大量真菌及中性粒细胞导致了角膜损伤，中后期特别是后期则可能是迟发型超敏反应导致的免疫损伤。(3)IL-6在AFK病程中是一个敏感的炎症因子，能反映局部的炎症反应程度。(4)IL-10在AFK病程中呈逐渐下降趋势，早期达高峰，中晚期逐渐下降。(5)ICAM-1在局部白细胞聚集，调节炎症反应、免疫反应强度中发挥重要作用。