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目的:肿瘤微环境中的趋化因子参与肿瘤恶性进展。研究报道CXCL5在多种肿瘤中异常表达,且促进肿瘤发生发展,但其在胃癌中作用及机制尚不明确。本研究检测CXCL5在胃癌细胞和组织、胃癌患者血清中的表达水平,分析其和临床病理指标间的关系,探讨CXCL5对胃癌细胞EMT发生以及对中性粒细胞活化的影响,揭示其直接和间接影响胃癌细胞体内外生物学功能的作用及机制,为胃癌诊疗提供新思路和策略。材料和方法:(1)QRT-PCR测定胃癌细胞、胃癌组织中CXCL5的基因表达水平,分析其与临床病理指标(年龄、性别、TNM分期、分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移、浸润深度等)的相关性。(2)ELISA测定胃癌患者血清、胃癌组织与胃癌细胞培养上清中CXCL5的蛋白表达水平。(3)rhCXCL5(外源性重组人CXCL5因子)及组织培养上清处理胃癌细胞HGC-27、BGC-823、中性粒细胞,观察胃癌细胞迁移侵袭情况、中性粒细胞趋化情况。QRT-PCR测定胃癌细胞EMT相关基因与中性粒细胞炎症因子表达情况。Western blot技术检测胃癌细胞EMT相关蛋白表达情况以及中性粒细胞相关信号通路蛋白活化情况。(4)中性粒细胞条件培养上清作用于胃癌细胞HGC-27、BGC-823,观察胃癌细胞迁移侵袭情况,Western blot技术检测胃癌细胞EMT相关蛋白表达情况。采用中和抗体验证中性粒细胞表达的炎症因子IL-6和IL-23对胃癌细胞迁移侵袭及EMT的促进作用。(5)使用rhCXCL5及其预处理的中性粒细胞条件培养上清作用后的胃癌细胞BGC-823构建裸鼠腹腔转移瘤模型,观察裸鼠肿瘤在腹腔定植以及肝脏转移情况,转移瘤数量的变化以及转移瘤组织EMT相关指标的变化。结果:(1)QRT-PCR结果显示CXCL5在胃癌细胞及胃癌组织中的表达水平较正常胃粘膜上皮细胞和对照组织显著升高。临床病理参数相关性分析显示CXCL5表达水平与TNM分期及淋巴结转移有关。(2)ELISA结果表明CXCL5在胃癌患者血清、胃癌细胞、胃癌组织培养上清中的含量较健康体检者血清、正常胃粘膜上皮细胞和对照组织培养上清明显升高。(3)rhCXCL5及胃癌组织培养上清处理HGC-27、BGC-823和中性粒细胞后,胃癌细胞体外迁移侵袭能力显著增强,中性粒细胞体外趋化能力明显加强,QRT-PCR和Western blot结果表明胃癌细胞EMT相关指标如N-cadherin等升高,而E-cadherin下降。中性粒细胞相关炎症因子如IL-6、IL-8、IL-17、IL-23等mRNA水平显著升高。Western blot结果显示胃癌细胞ERK及中性粒细胞ERK、p38显著磷酸化。(4)rhCXCL5及胃癌组织培养上清预处理的中性粒细胞培养上清作用于胃癌细胞后,胃癌细胞体外迁移侵袭能力明显加强,Western blot结果显示胃癌细胞EMT相关指标如N-cadherin等升高,E-cadherin则降低。IL-6和IL-23中和实验结果显示rhCXCL5预处理的中性粒细胞促进胃癌细胞迁移侵袭的能力及EMT的作用均被逆转。(5)裸鼠腹腔转移瘤实验结果显示,与对照组相比,rhCXCL5及其预处理的中性粒细胞条件培养上清处理组形成更多的腹腔定植瘤和肝脏转移瘤。IHC、QRT-PCR、Western blot结果显示转移瘤组织EMT相关指标N-cadherin等升高,E-cadherin则下降。结论:趋化因子CXCL5在胃癌细胞和胃癌组织、胃癌患者血清以及胃癌细胞和组织培养上清中表达上调,且其表达水平与肿瘤恶性进展有关。CXCL5一方面通过直接诱导胃癌细胞ERK信号通路活化发生EMT;另一方面通过趋化并激活中性粒细胞ERK和p38信号通路,高表达IL-6和IL-23等炎症因子,进而诱导胃癌细胞发生EMT。CXCL5通过直接和间接双重作用共同促进胃癌转移。本研究为揭示CXCL5在胃癌发生发展中的作用机制提供了新的证据,同时也为胃癌诊断和治疗提供了新的靶点。