【摘 要】
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该实验室在前期工作中已获得含有香蕉果肉ACC合酶1.69kb cDNA的pMACS质粒.该研究对克隆到的cDNA进行了亚克隆及序列测定.为了确定ACC合酶转录起始位点,根据序列测定结果设计
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该实验室在前期工作中已获得含有香蕉果肉ACC合酶1.69kb cDNA的pMACS质粒.该研究对克隆到的cDNA进行了亚克隆及序列测定.为了确定ACC合酶转录起始位点,根据序列测定结果设计引物,进行5RACE扩增产物的克隆及序列测定,最终确定香蕉果肉中ACC合酶的转录起始位点为G,其cDNA全长为1752个核苷酸,其中5非翻译区74个核苷酸,编码区1461个核苷酸,3非翻译区217个核苷酸.编码产物为486个氨基酸,计算分子量为55kD,pI值为6.95.将核苷酸序列及推测的氨基酸序列与其它植物ACC合酶进行比较,结果表明该香蕉ACC合酶与其它植物ACC合酶一样具有七个保守区.Northern杂交需要高质量的总RNA,研究小组对香蕉总RNA的提取方法进行了摸索,结果表明:1)Ainsworth的方法适合于香蕉根组织的总RNA的提取;2)R.Lopez-Gomez的方法可以从香蕉果肉和叶中提取高质量的总RNA;3)Shujun Chang的方法对香蕉果皮决RNA的提取最有效.通过Northern杂交分析,证明此ACC合酶基因的表达具有果实特异性,在幼小及年老植株的叶和根中均测不到其转录物的存在.此外,研究小组还构建了ACC合酶的瞬时表达载体.
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