第一部分 稳定表达上皮钙黏蛋白(E-cadherin)基因显性负调控突变体的人炎性乳腺癌细胞模型的构建 目的:构建稳定表达E-cadherin基因显性负调控突变体(H-2k~d-E-cadherin)的人炎性乳腺癌细胞模型。 方法:通过脂质体介导的外源性基因导入技术,将编码并表达E-cadherin基因显性负调控突变体(H-2k~d-E-cadherin)的质粒pcDNA 3.1(-)导入人炎性乳腺癌细胞系SUM149,应用RT-PCR、流式细胞分析法筛选、鉴定出E-cadherin基因显性负调控突变体高表达的阳性克隆。 结果:筛选并鉴定出了E-cadherin基因显性负调控突变体高表达的SUM149细胞,RT-PCR和蛋白印迹法检测均显示,E-cadherin基因显性负调控突变体高表达的SUM149细胞的内源性E-cadherin的表达一致性的下调(P=0.000)。 结论 构建了E-cadherin基因显性负调控突变体稳定高表达的的人炎性乳腺癌细胞SUM149/H-2k~d,为进一步研究E-cadherin对人炎性乳腺癌细胞生物学行为影响提供了良好的细胞模型。