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目的:1.建立准确、可靠的超高效液相与线性阱轨道离子阱组合高分辨质谱（UHPLC-LTQ-Orbitrap XL;LC-MSn）定性方法分析大鼠尿液中黄柏碱的葡萄糖醛酸结合物;2.从给药后大鼠尿液中分离制备黄柏碱的葡萄糖醛酸Ⅱ相代谢产物并鉴定其结构;3.建立准确、可靠、灵敏度高的液相-串联质谱（LC-MS/MS）法同时测定黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物在大鼠血浆中浓度;4.采用已建立的LC-MS/MS法,比较正常大鼠口服黄柏碱单体低、中、高剂量;Ⅱ型糖尿病大鼠口服黄柏碱单体中剂量;正常大鼠口服黄柏单煎液以及知母黄柏药对合煎液冻干粉后血浆中黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物的在大鼠体内药动学特征。方法:1.采用UHPLC-LTQ-Orbitrap XL（LC-MSn）技术,大鼠灌胃黄柏碱后尿液中葡萄糖醛酸结合物定性分析方法的建立:色谱柱为依利特Hypersil C18柱（4.6×250mm,10μm）;流动相为0.1%甲酸水-乙腈,等度洗脱（65:35）,流速为400（?）L·min-1;柱温30℃;检测波长为284 nm,进样量为10（?）L;采用电喷雾离子源（ESI）;检测方式为正离子碰撞解离诱导（CID）模式;MS1采用傅里叶变换质谱扫描（FTMS）,分辨率为30000;MS2和MS3采用数据依赖扫描,分辨率为15000。其他质谱设置参数为喷雾电压为4 k V,鞘气为45 arb,雾化温度为350℃,碰撞能为35 e V。2.大鼠灌胃给药后,收集尿液,通过AB-8大孔树脂层析柱、ODS开放层析柱、Sephadex LH-20凝胶层析柱、制备液相等进行黄柏碱葡萄糖醛酸结合物的制备分离,并通过UV,ESI-MS,1H-NMR,13C-NMR,HSQC,HMBC等信息鉴定结构。3.黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物在大鼠血浆中血药浓度测定方法的建立:以乌头碱为内标,生物样品采用甲醇:甲酸（9:1）沉淀法处理。色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（150 mm×2.1 mm,3.5μm）;流动相A为0.1%甲酸水,流动相B为甲醇,采用梯度洗脱,0～1 min:5%B相;1～6 min:5%～95%B相;6～8 min,95%B相;8～8.5 min,95%～5%B相;8.5～10 min,5%B相;总分析时间为10 min;流速为300μL·min-1;柱温为35℃;进样量为5μL;进样器温度设置为4℃。采用电喷雾（ESI）离子源;检测方式为正离子多离子反应（MRM）;雾化温度为600℃;喷雾电压（IS）为5000 V;碰撞气（CAD）为6 psi;气帘气（CUR）为25 psi;雾化气1（GS1）为60 psi;雾化气2（GS2）为50 psi。4.SD雄性大鼠随机分为6组,分别灌胃黄柏碱单体20、40和80 mg·kg-1剂量;Ⅱ型糖尿病模型SD大鼠口服黄柏碱40 mg·kg-1剂量;正常大鼠灌胃黄柏单煎液冻干粉和知母黄柏药对合煎液冻干粉后,定时眼眶采血,制备血浆,采用已建立的LC-MS/MS法测定血浆中黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物的浓度,绘制药时曲线,计算药物动力学参数,并对主要药动学参数进行统计分析。结果:1.通过建立定性分析方法比较大鼠空白尿样和给药尿样的液相色谱图以及质谱信息,初步鉴定准分子离子m/z～694的代谢物为黄柏碱双葡萄糖醛酸结合物,m/z～518的代谢物为黄柏碱单葡萄糖醛酸结合物。建立了准确、可靠的LC-MSn定性方法分析追踪黄柏碱葡萄糖醛酸结合物。2.通过AB-8大孔树脂层析柱、ODS开放层析柱、Sephadex LH-20凝胶层析柱、制备液相等首次从大鼠灌胃黄柏碱有效部位后的尿样中提取分离制备出3个新的黄柏碱葡萄糖醛酸结合物,分别是黄柏碱-2,11-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷（纯度>99%）,黄柏碱-2-O-葡萄糖醛酸苷,黄柏碱-11-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（纯度>98%）。3.黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物在大鼠血浆中定量分析方法的建立:黄柏碱、黄柏碱-11-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和黄柏碱-2,11-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷的线性范围分别是1～100、1～1200、10～1000 ng·m L-1;定量下限分别是1、1、10 ng·m L-1;提取回收率为（71.93±3.87）%～（91.50±4.76）%;基质效应为（90.39±1.62）%～（127.69±4.84）%;准确度在（96.08±1.88）%～（110.20±4.97）%;日内、日间精密度RSD≤10.53%;在室内4 h、进样器4℃下24 h、-80℃下30 d、冻融3次等条件下稳定。4.黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物的药代动力学研究:灌胃给药后,3个成分在体内均能检测到,黄柏碱-11-O-β-D-葡萄糖醛酸苷血药浓度最高,黄柏碱-2,11-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷次之,原形黄柏碱最小。黄柏碱单体20 mg·kg-1、40 mg·kg-1、80 mg·kg-1剂量给药后,3个成分的Cmax和AUC随剂量增加而增加,呈正相关性。单结合物的AUC随剂量成比例增加,而Cmax的增加则与剂量不成比例。黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物在糖尿病大鼠和正常大鼠的药代动力学行为有变化,但无统计学差异。3个成分在不同配伍条件下血药浓度变化趋势一致,除双结合物在黄柏组的Cmax明显高于药对组外,其它参数均无组间统计学差异。结论:本文首次对黄柏碱的Ⅱ相代谢产物葡萄糖醛酸结合物进行了系统研究,建立的UHPLC-LTQ-Orbitrap XL（LC-MSn）方法灵敏、准确、快速,可用于黄柏碱葡萄糖醛酸结合物的定性分析。从尿液制备代谢产物的技术路线成熟、可靠、快速,首次从给药后尿液中分离制备了3个新的黄柏碱葡萄糖醛酸结合物,为黄柏碱在大鼠体内的定量研究提供了物质基础。首次建立了准确、快速、灵敏的LC-MS/MS法,用于黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物在大鼠体内血药浓度的测定。黄柏碱在大鼠体内吸收较快,迅速代谢为葡萄糖醛酸结合物,黄柏碱-11-O-β-D-葡萄糖醛酸苷含量最高,黄柏碱-2,11-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷含量次之,原形黄柏碱含量最少。黄柏碱双葡萄糖醛酸结合物在黄柏碱20～80 mg·kg-1剂量范围内表现线性动力学特征,黄柏碱和单葡萄糖醛酸结合物在不同剂量下的药动学特征有变化。黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物在Ⅱ型糖尿病病理状态和正常状态下的药动学特征有变化。黄柏和黄柏配伍知母后给药对黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物药动学的影响无明显变化。