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从培养的人肝细胞抽提总RNA，用RT-PCR方法扩增得到人破骨细胞形成抑制因子（Osteoclastogenesis Inhibitory factor，OCIF），或称骨保护素（osteoprotegerin，OPG）成熟肽编码基因序列。RT-PCR所得产物与pMD18-T连接，转化大肠杆菌K802，筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-OCIFm，对所获得的含OCIF／OPG活性结构域编码的重组质粒进行DNA序列分析，结果与GenBank报道序列完全一致。双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm，得到OCIF／OPG成熟肽基因，将其定向插入同样双酶切的pProEX-HTa载体中，转化大肠杆菌BL21（DE3）。筛选得到阳性重组表达子后，用IPTG诱导表达。所表达的产物经SDS-PAGE分析可见在相对分子量80kD处出现一条新条带，与预期OCIF／OPG融合蛋白的分子量一致。用OCIF／OPG特异性—抗行Western Blot，证实重组表达产物能与其特异性结合。以Ni2+亲和层析柱初步纯化的表达产物，能诱导体外培养的小鼠破骨细胞凋亡，并呈剂量依赖性。 应用Stratagene BacterioMatch two hybrid system，以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达表达质粒；以pBT构建编码DR4，DR5，OCIF／OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF，报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。所构建的pTRG-TRAIL与pBT-DR4，pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素（500 μg／ml）筛选下宿主菌呈转录激活状态，pTRG-TRAIL与pBT-OPG组共转化后在低浓度羧苄青霉素（250 μg／ml）筛选下宿主菌呈转录激活状态，用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆。对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2，pBT-DR4与pTRG-Gal11，pBT-DR5与pTRG-Gal11或pBT-OPG与pTRG-Gal11四组共转化后呈阴性。由此直接证实了OCIF／OPG与TRAIL能直接结合，但亲和力较TRAIL与DR4、DR5要小。另外，由于所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域，而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证，所以证实了细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究。OCIF／OPG与张弛:OCIF/OPG基因的克隆、表达和活性TRAIL的相互作用，在用OCIF/OPG重组表达产物中和TRAIL诱导人胰腺癌SW199O细胞凋亡的活性中也被证实。 本课题成功获得了人OCIF/o PG成熟肤基因，并实现了在大肠杆菌中的重组融合表达;OC正/o PG可与TRAIL直接相互作用，但亲和力较TRAIL与DR4、DRS要低;重组表达的OCIF/OPG可诱导成骨细胞凋亡，并能抑制TRAIL对肿瘤细胞的细胞毒效应，由此建立了初步的OCIF/OPG蛋白的生物学活性测定方法，为进一步的研究奠定了基础。