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三七为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen的干燥根,性温,味甘、微苦,归肝、胃经；具有散瘀止血,消肿定痛之功,用于咯血,吐血,衄血,便血,崩漏,外伤出血,胸腹刺痛,跌扑肿痛等症。熟三七则有补气补血、强身健体之功,在临床和民间多药食两用,主要用于血虚证,产后虚弱,气血不足等；也可用于身体虚弱,气血不足,症见面色苍白、头昏眼花、四肢无力、食欲不振。目前生三七的相关研究不少,但对三七炮制品的研究不多。作为一种常用中药,2010版《药典》中只有三七生品。三七的炮制方法多是高压蒸制,对常压蒸制、油炸以及其他炮制方法的研究不多。本实验通过对三七进行含量测定、炮制、指纹图谱、药理研究,系统阐述三七炮制前后化学成分变化和药理差异,为深入研究三七炮制机理奠定基础。研究方法及结果如下：1三七中五种皂苷类成分和三七素的含量测定1.1HPLC法同时测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的含量色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相：水-乙腈,梯度洗脱,0～21min80:20,21～30min80:20～75:25,30～1min75:25～59:41,41～51min59:41～55:45,51～56min55:45～80:20,56～66min80:20(体积比)：柱温：20℃；进样量：10μL；流速：1mL/min;检测波长：203nm。五种成分的线性方程分别是三七皂苷R1Y=304.60X-1.1457,人参皂苷Rgi Y=371.97X-29.646,人参皂苷ReY=391.18X-6.7571,人参皂苷Rb1Y=270.76X+1.0893,人参皂苷Rd Y=329.50X+1.3643; r=0.9997～0.9998,加样回收率为97.6～101.7%。1.2HPLC法测定三七中三七素的含量色谱柱：Agilent Zorbax SB-Aq (250mmx4.6mm,5μm),流动相：甲醇：0.05%冰乙酸=35：75,柱温：20℃,检测波长：213nm,流速：0.8mL/min,进样量：101μL。线性方程Y=1980.4X-83.431,r=0.9999o比较了生三七和蒸制熟三七中三七素的含量,其中生三七中三七素含量0.59%,蒸制熟三七中三七素含量为0.29%。2生熟三七的炮制研究2.1三七的炮制工艺研究考察了三七润制温度、时间,干燥温度,蒸制时间这几个因素,以润制效果、五种皂苷类成分含量为指标,最终确定三七润制温度为60℃,润制时间24-27h,干燥温度40℃,蒸制时间6h。2.2三七加热炮制方法研究考察了蒸制法、油炸法、砂炒法三种加热炮制方法炮制前后三七中五种皂苷类成分的含量。HPLC法测定结果为生品中三七皂苷R10.98%、人参皂苷Rgl3.27%、人参皂苷Re0.38%、人参皂苷Rbl2.72%、人参皂苷Rd0.66%；蒸制三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd含量依次为0.79%、2.69%、0.33%、2.49%、0.61%；油炸三七中此五种成分含量依次为1.09%、2.56%、0.18%、2.44%、0.57%；砂炒三七中依次为0.30%、1.15%、0.11%、1.00%、0.24%。对三七炮制前后HPLC色谱图比较发现,三七炮制后一些成分含量减少或消失,同时生成了一些新成分,其中某些新产生成分随炮制温度升高含量增加。3三七皂苷类成分指纹图谱研究3.1指纹图谱的建立和方法验证主要考察了提取方法、洗脱梯度对指纹图谱的影响。确定色谱条件为色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×250mm);流动相：水-乙腈,梯度洗脱,0～25min80:20,25～30min80:20～75:25,30～41min75:25～59:41,41～51min59:41～55:45,51～56min55:45～80:20,56～70min,80：20(体积比)；柱温：20℃；进样量：10μL；流速：1mL/min；检测波长：203nnm。精密度实验、重复性实验、稳定性实验中10个共有峰相对峰面积的相对标准偏差(RSD)均小于3%。3.2不同蒸制时间炮制品指纹图谱研究三七常压蒸制Oh、2h、4h、6h、8h,建立不同蒸制时间制品的指纹图谱,标定11个共有峰,0h、2h、4h制品指纹图谱相似度>0.99,6h、8h制品相似度>0.76,6h相似度低于8h。对不同时间制品指纹图谱进行聚类分析,Oh、2h、4h、8h归为一类,6h归为一类。由相似度和聚类分析结果可看出6h制品指纹图谱特征与其它蒸制时间制品差异最大,可以得出三七常压蒸制最佳时间为6h,与炮制工艺中确定的蒸制时间一致。4生三七和蒸制熟三七部分药理作用比较研究4.1生熟三七的止血作用比较用断尾法和毛细玻管法测定小鼠的出血时间和凝血时间,各给药组均能显著缩短小鼠出血时间；生三七能显著缩短小鼠凝血时间,熟三七则对凝血时间有缩短趋势,但影响不显著。表明在止血作用方面,生三七好于熟三七。4.2生熟三七的活血作用比较高分子右旋糖酐-冰水浴建立小鼠血瘀模型,测定小鼠耳廓微循环和血液流变学指标评价生熟三七的活血作用。生三七、蒸制熟三七对微循环障碍小鼠耳廓微动脉口径影响不显著,对微静脉口径10min、20min时影响不显著,生三七高、低剂量组均能显著增加微循环障碍小鼠30min时微静脉口径、毛细血管开放量和20min时毛细血管开放量；复方丹参片组可显著降低微循环障碍小鼠的全血黏度,熟三七高剂量组有降低的趋势,但作用不显著。表明在改善微循环方面,生三七好于熟三七,熟三七组仅高剂量组有一定作用,而且起效较慢；在改善血液黏度方面,熟三七好于生三七。4.3生熟三七的补血作用比较建立小鼠失血性贫血模型,测定血常规指标和重要脏器(胸腺、脾脏、肾上腺)指数,评价生熟三七的补血作用。生三七、蒸制熟三七均能极显著升高失血性贫血小鼠红细胞总数、血红蛋白含量、白细胞总数,熟三七作用略好于生三七,但无显著性差异;对失血性贫血小鼠脏器重量的影响不显著。表明生三七、蒸制熟三七对失血性贫血小鼠均有显著的补血作用,熟三七作用略好于生三七,但生、熟三七比较差异无显著性。4.4生熟三七的补虚作用比较环磷酰胺诱导小鼠气血虚弱、免疫力低下模型,测定血常规指标和重要脏器(胸腺、脾脏、肾上腺)指数,评价生熟三七补虚作用。生三七、蒸制熟三七对环磷酰胺所致气虚小鼠红细胞总数影响不显著,熟三七高剂量组能显著增加气虚小鼠血红蛋白含量,各给药组显著增加气虚小鼠白细胞总数(尤以复方阿胶浆组和熟三七高剂量组作用更显著)；与模型组比较,熟三七高、低剂量组各脏器指数均极显著升高,生三七高、低剂量组有升高的趋势,但作用不显著。表明在提高免疫、补气作用方面熟三七好于生三七。