竹叶的医疗保健作用早已为中国人所认识,对其含有的生物活性成分的研究与开发,具有十分重要的意义和价值。本论文为了研究开发竹叶中新型天然抗菌肽,对竹叶中的活性多肽、蛋白,利用溶剂浸提、梯度盐析沉降、透析除盐后得到竹叶多肽蛋白粗提物,再经过分子筛、弱阴离子交换柱层析等技术进行进一步分离纯化,以获得完全纯化的竹叶抗菌肽。采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析鉴定所得活性多肽的分子量和纯度,以抑菌效果(抑菌圈直径)来分析该竹叶天然抗菌肽的抑菌、防腐作用以及其稳定性等生理活性和功能,抑菌机理也得到初步研究。在本研究中,我们分离纯化得到了一种新型的竹叶抗菌肽,该竹叶抗菌肽对细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌以及蜡状芽孢杆菌)具有很好的抑制作用,并具有良好的应用性能和稳定性。通过对抗菌肽抑菌机理的研究,初步认定竹叶抗菌肽是一种胰蛋白酶抑制剂。以上研究,为竹叶中新型、天然安全的抗菌肽的开发应用和深入探索,提供了理论和实际基础与技术支持。在本论文的研究中,首先,用PBS缓冲液对竹叶粉进行浸提,再分别进行30%、60%、80%三级饱和硫酸铵盐析梯度沉降,沉淀物经截留分子量3000Da的透析袋透析后浓缩得到竹叶蛋白多肽粗提物。利用纸片法对粗提物进行抑菌活性检测,并用SDS-PAGE电泳法确定其分子量范围。结果表明:竹叶多肽具有很强的抑菌活性,尤其对细菌的抑制作用最强,并且60%和80%饱和度硫酸铵盐析下得出的提取物抑菌活性明显强于30%饱和度。其次,分别采用凝胶层析法和离子交换色谱层析法对竹叶蛋白肽粗提物进行分离纯化,最终分离得到纯化的竹叶抗菌肽产物,SDS-PAGE凝胶电泳显示纯化物为两个条带,测得其相对分子量分别为99776Da和45604Da。根据以上结果分析,竹叶中的天然抗菌肽可能是两种不同分子量的多肽混合物,也可能是同种蛋白肽的二聚体形式,具体分子结构有待进一步探索研究。再次,对纯化的竹叶天然蛋白肽进行抑菌谱、最低抑菌浓度、热稳定性、pH稳定性、有机溶剂稳定性和酶稳定性等性能研究,最终得出从竹叶中提取出的天然抗菌肽具有广谱的抗菌特性,尤其对细菌表现出强烈的抑制作用,并且在较低的浓度下就能对细菌表现出良好的抑制作用。对酵母菌也有一定的抑制作用,而对霉菌的抑制作用不明显。该抗菌肽在pH 3.0-11.0之间都很稳定;在120℃加热10min仍然稳定存在;对不同的酶和有机溶剂也表现出良好的稳定性。最后,采用BAPNA法,初步探索了该竹叶天然抗菌肽的抑菌机理,该竹叶天然抗菌肽被证实具有抗胰蛋白酶活性,是一种胰蛋白酶抑制剂,初步阐明了其抑菌抗菌机理,为更深层次探索其抑菌机理、结构功能关系奠定了基础。