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嗜水气单胞菌能导致鱼类细菌性疾病并造成大面积流行，给水产养殖业造成巨大的经济损失。嗜水气单胞菌病的免疫预防研究已成为鱼病学研究的热点，国内已开发了嗜水气单胞菌灭活全菌疫苗，其亚单位苗和基因工程苗也正在研究中。溶血素是嗜水气单胞菌重要的毒力因子和保护性抗原，是目前嗜水气单胞菌亚单位苗和基因工程苗研究的重要对象。本研究在构建嗜水气单胞菌β-hemA基因重组菌的基础上，探讨重组菌的优化培养，提高基因产物的表达量，应用基因表达的β-溶血素制备免疫刺激复合物，为嗜水气单胞菌亚单位疫苗奠定技术基础。 通过设计正交试验探讨温度、培养基、时间三个因素对嗜水气单胞菌β-hemA重组菌E．coli DH5。（命名为PCB）基因产物表达量的影响，选择最佳培养条件，实现优化培养，提高了β-hemA基因产物的产量。实验结果表明：该重组菌株在100mLTSB（添加0.05％酵母浸提物，1.8μg／mL ZnCl2），37℃培养30小时收获，其毒素蛋白含量为3258μg，毒素溶血价为17.44hu／μg，而在LB（100mL）和营养肉汤（100mL）中最高蛋白量和溶血价分别为1260μg，14hu／μg和1199μg，8.22hu／μg。所选择的三个因素中对毒素蛋白质含量影响最大的是培养基，其次是温度；而对溶血作用影响最大的则是温度，其次为时间。最佳生长曲线测定结果表明，在培养基预热至37℃的情况下，PCB 6小时能进入对数期。 重组菌PCB培养物经硫酸铵浓度梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2.5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与Quil A、卵磷脂、胆固醇等结合制备β-hemA-ISCOMs（Immune Stimulating Complexes，ISCOMs），透射电镜下可观察到β-hemA-ISCOMs，呈直径40nm左右的多面体的笼格状颗粒结构。 用β-hemA-ISCOMs（以下简称ISCOM组）、β-hemA-CFA（弗氏佐剂，以下简称CFA组）和β-hemA-Free Adiuvant（以下简称FA组）免疫接种鳗鲡，以PBS作为空白对照，免疫保护试验证实，同剂量的ISCOMs组比CFA组和FA组对本菌株TPS-30攻击具有更高的保护率，ISCOMs组可达100％，福建农林大学硕士学位论文CFA组能达87.5%，而FA组只有50%;交叉免疫保护实验证实:鳗鲡经ISCOMs免疫后除了能抵抗本菌株TPS一30的攻击外，还能产生抗异源菌株WQ免疫保护力，其中，IsCOMs组对wQ保护率为100%，未加佐剂组对WQ的保护率仅为33%。淋巴细胞增殖ELISA试验显示，在免疫剂量和Co认刺激剂量均相同的情况下，IsCOMs免疫组淋巴细胞的ELISA OD450比FA免疫组高出0.3。