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目的和意义在日常生活中由不同原因导致的周围神经损伤非常常见,其中坐骨神经损伤是周围神经损伤中较常见的损伤之一。坐骨神经损伤能导致患侧肢体运动及感觉障碍,给个人及家庭生活造成极大的负担。近年来,随着社会的发展,人们对坐骨神经损伤修复的研究取得了很大的进步,例如应用电磁场改变内部环境,应用干细胞移植及神经营养因子促进神经自身修复等。但是目前由于神经本身及外部的很多原因人们还未寻找出一种令人满意的方法来治疗坐骨神经损伤。神经母细胞瘤是儿童最常见的恶性肿瘤之一,肿瘤处于Ⅰ、Ⅱ期时生长局限、分化良好并且外科手术就能切除,然而处于Ⅲ期和Ⅳ期的肿瘤具有播散性,能够迅速出现恶化,预后不良。神经退行性疾病如阿尔兹海默病和帕金森氏病的研究中经常应用人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y),应用不同因素如神经营养因子处理细胞可以使SHSY5Y细胞在生物化学、超微结构以及电生理方面与神经元类似。观察人神经母细胞瘤细胞提取液在体内及体外对神经的作用,从而研究神经母细胞瘤细胞提取液对受损坐骨神经的修复与再生中的作用,为神经损伤修复寻找新方法提供理论依据。材料与方法首先,应用超声破碎法得到人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)提取液及白血病细胞(MEG-01)提取液,BCA蛋白定量及蛋白电泳法检测细胞提取液的蛋白稳定性。将不同浓度神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)提取液、白血病细胞(MEG-01)提取液、肺癌细胞(A549、GLC-82)提取液、结直肠癌细胞(LOVO)提取液及人胚肾细胞(HEK293)提取液分别加入神经母细胞瘤细胞观察增殖情况；分离培养新生SD大鼠大脑皮层细胞,将不同浓度SHSY5Y细胞提取液、MEG-01细胞提取液及HEK293细胞提取液分别加入第三代大脑皮层细胞中观察增殖情况,然后将SHSY5Y细胞提取液、MEG-01细胞提取液、HEK293细胞提取液分别加入第一代大脑皮层胞中,用结晶紫染色及免疫细胞化学染色法观察细胞形态及性质；最后建立了大鼠坐骨神经损伤模型。将24只健康成年雄性SD大鼠随机分为4组,生理盐水治疗组(n=6)、SHSY5Y提取液治疗组(n=6)、HEK293提取液治疗组(n=6),自体神经移植组(n=6)。4、8、12W观察大鼠后肢恢复情况,12W后计算小腿三头肌湿重恢复率,病理学实验观察神经再生情况及小腿三头肌肌纤维萎缩恢复程度。结果1.应用超声裂解法得到的三批不同的细胞提取液,蛋白定量结果显示三批细胞提取液之间蛋白含量相差不大(SHSY5Y细胞提取液95%可信区间为(11.44,17.31)；MEG-01细胞提取液95%可信区间为(5.48,6.10))。三批细胞提取液蛋白电泳显示蛋白条带位置基本一致;2. SHSY5Y细胞提取液等六种细胞提取液促SHSY5Y细胞增殖研究,结果显示SHSY5Y细胞提取液与白血病细胞(MEG-01)提取液的促SHSY5Y细胞增殖作用相似(P>0.05),结直肠癌细胞(LOVO)提取液、人胚肾细胞(HEK293)提取液、肺癌细胞(A549、GLC-82)提取液四种细胞提取液无促SHSY5Y细胞增殖作用。SHSY5Y细胞提取液在25μg/ml,50μg/ml,100μg/ml三种不同浓度下其增殖作用与上述四种细胞提取液对比均有显著统计学意义(F=184.17、246.34、170.43,P均<0.001),对正常星形胶质细胞的增殖作用不明显(P>0.05)；3. SHSY5Y细胞提取液选择性扩增第一代大脑皮层细胞中辐射状细胞的数量研究,结果显示SHSY5Y细胞提取液较MEG-01细胞提取液及HEK293细胞提取液有明显增殖作用,经统计学分析有明显差异(F=208.92,P<0.01)；4.β-tubulin染色显示SHSY5Y细胞提取液组存活的神经元细胞数量较多,分别与MEG-01细胞提取液组和HEK293细胞提取液组对比均有统计学意义(F=86.96,P<0.01,P<0.05);5.坐骨神经离断法制作坐骨神经损伤模型,应用不同提取液治疗12周,结果显示SHSY5Y细胞提取液增大再生神经的直径,对比生理盐水治疗组、HEK293细胞提取液治疗组均有统计学意义(F=246.94,P<0.01,P<0.05)；6.坐骨神功能指数测定结果显示各组间有显著差异(F=80.56,P<0.001),术后治疗4w自体神经移植组坐骨神经功能指数最高,较SHSY5Y细胞提取液治疗组增高有显著统计学意义(P<0.001),SHSY5Y细胞治疗组、HEK293细胞提取液治疗组及生理盐水组坐骨神经功能指数基本相同,经统计学分析均无统计学意义(P均>0.05)；术后8w SHSY5Y细胞提取液组比HEK293细胞提取液组、生理盐水治疗组坐骨神经功能指数增大,对比有统计学意义(F=289.23、P<0.05)，以12w时作用更明显,对比有显著统计学意义(F=273.27,P<0.01)；7.小腿三头肌湿重恢复率测定结果显示各组间对比有显著差异(F=153.46,P<0.01),其中自体神经移植组最高,经统计学分析有明显差异(P<0.01), SHSY5Y细胞提取液治疗组次之,经统计学分析有明显差异(P<0.05)；8.病理学检测,术后12w取术侧小腿三头肌及再生坐骨神经做纵、横切片HE染色,结果显示,SHSY5Y细胞提取液组有极少量的中性粒细胞,未见出血；各组坐骨神经横切片做P-tubulin免疫组化染色,SHSY5Y细胞提取液组染色阳性细胞数目较多。结论1.用超声破碎法得到的SHSY5Y及MEG-01提取液具有良好的蛋白稳定性；2.SHSY5Y细胞提取液能够促进SHSY5Y细胞的增殖,而对正常星形胶质细胞的增殖作用不明显；3.SHSY5Y细胞提取液能够选择性扩增第一代大脑皮层细胞中辐射状细胞的数量,并维持神经元细胞的体外存活；4.SHSY5Y细胞提取液能够减轻损伤部位炎症反应、出血及萎缩程度,促进坐骨神经损伤修复。