论文部分内容阅读
目的(1)研究不同病理级别的胶质瘤肿瘤干细胞CD133的表达及其分布规律。(2)观察不同病理级别的人脑胶质瘤的肿瘤干细胞在体外分离培养和增殖分化的情况。并探讨低级别和高级别胶质瘤的肿瘤干细胞在体外增殖和分化上的差异,以及它的特异性抗体CD133在分化进程中的表达情况。为进一步探讨脑肿瘤干细胞分子调控机制打下基础。方法采用方法:(1)对78例Ⅰ-Ⅳ脑胶质细胞瘤的病理切片进行CD133免疫荧光染色和免疫组化染色,观察和比较不同病理级别脑胶质细胞瘤肿瘤干细胞之间的分布特点。(2)通过对不同病理级别手术切除的胶质细胞瘤新鲜标本在体外无血清培养基中分离培养和体外增殖分化进行观察研究和分组比较它们的增殖能力。采取体外分离培养和分组计数、单克隆纯化、免疫荧光鉴定、分组血清分化后免疫荧光标记对比等方法来检测不同病理级别的脑胶质细胞瘤肿瘤干细胞之间的差异性。结果(1)脑肿瘤干细胞在不同病理级别的胶质瘤石蜡组织切片上CD133阳性表达中,在低级别脑胶质细胞瘤中表达很低,以零星分布的存在,未见脑肿瘤干细胞集聚现象;在Ⅲ、Ⅳ胶质细胞瘤组织切片上可以见到数个细胞聚集在一起,在髓母细胞瘤尤为明显,而且Ⅱ-Ⅳ级胶质细胞瘤可以见到多数是围绕着血管或在血管旁,呈巢状分布的均近血管边缘。(2)在无血清培养基中,Ⅰ级胶质瘤的肿瘤干细胞不能形成克隆球;Ⅱ级胶质瘤的肿瘤干细胞可形成中等克隆球;只有Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤的肿瘤干细胞才能形成大型克隆球。在血清培养基中,Ⅰ级胶质瘤干细胞增殖缓慢、分化较晚;Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤的肿瘤干细胞增殖迅速、快速进入分化期;Ⅱ级胶质瘤肿瘤干细胞增殖分化介于两者之间。分组比较,发现在不同培养基中和不同病理级别胶质瘤干细胞各组之间在增殖和分化能力上均存在统计学差异(P <0.01)。结论(1)胶质瘤的肿瘤干细胞在组织切片上的数量与胶质瘤病理级别呈正相关性。随着胶质瘤病理级别的升高,肿瘤干细胞分布从低级别的零星分布至高级别的聚集、巢状分布于血管周围。(2)胶质瘤的肿瘤干细胞在生物特性上存在多样性。Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤的肿瘤干细胞易于分离培养,增殖分化能力较强,有助于成功地建立动物实验模型。而Ⅰ级胶质瘤的肿瘤干细胞增殖分化缓慢,有助于动态观察脑肿瘤干细胞自我更新和增殖分化的过程,是一个较好的观察研究对象。