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本研究从石油受污环境中分离筛选得到52株产鼠李糖脂菌株，通过初筛、复筛得到鼠李糖脂高产菌株B3。染色实验表明，B3是革兰氏阴性短杆菌，有周身鞭毛。分析游离细胞的生长规律，通过单因素实验对游离细胞的发酵条件进行优化，实验表明，B3游离细胞的最适鼠李糖脂合成条件为:以菜籽油为碳源，15％接种量，35℃，140r/min振荡培养84h，鼠李糖脂产量可达到3096.25mg/L。 在对游离细胞研究的基础上，应用包埋法结合交联法制备优良的固定化细胞发酵体系。载体复配实验表明，使用2.0％海藻酸钠、1.0％聚乙烯醇、0.4％戊二醛复配载体制作的固定化细胞成球情况良好、机械强度优良、具有较高的鼠李糖脂产量且可连续使用3个生产周期，极大地简化了育种工艺。对固定化细胞合成鼠李糖脂的发酵条件进行优化。单因素实验的最适固定化细胞发酵条件为:37℃，15％接种量，初始pH7.0，120r/min振荡培养96h，鼠李糖脂产量达到4702.25mg/L。利用响应曲面法（RSM）对B3固定化细胞合成鼠李糖脂的条件进行了优化，运用Box-BehnkenDesign(BBD)模型，以二次回归方程预测模型为基础，得到B3固定化细胞合成鼠李糖脂的最优条件为:37.64℃，15.39％接种量，初始pH6.94，120r/min振荡培养100.66h，在此条件下鼠李糖脂产量可达到4843.25mg/L。运用19L发酵罐进行扩大培养，鼠李糖脂产量仍然保持在4515.00mg/L，表明该固定化细胞合成体系具有良好的生物合成鼠李糖脂稳定性。 通过红外光谱和薄层色谱分析，菌株B3合成的表面活性剂确为鼠李糖脂。理化性质研究表明，B3所合成的鼠李糖脂可使液体发酵培养基表面张力从56.847mN/m下降为33.542mN/m，使油-水界面张力从13.586mN/m降至1.171mN/m，CMC值为72.05mg/L，说明所合成的鼠李糖脂具有较高的表面活性。经过油-水界面张力的测定和室内模拟驱油实验，筛选出最优复配体系，其配方为:发酵液+0.45％Tween80+1.0％Na2CO3+0.15％聚丙烯酰胺。该复配体系可将油-水界面张力从13.586mN/m降至0.059mN/m，而且对提高原油采收率有明显作用，可在水驱的基础上提高原油采收率29.0％。这为鼠李糖脂的工业生产和提高原油采收率的应用提供一定的参考。