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研究目标： 本研究通过构建犬急性一壁牙周缺损（acute one-wall intrabony defects）模型，使用犬自体牙髓干细胞和牙周膜干细胞接种于PGA纤维支架材料构建的组织工程 化韧带联合混合骨粉材料（β-磷酸三钙和自体骨混合）后植入于犬的一壁牙周缺损处，探讨这种组织工程方法用于牙周组织再生的可能性，为该组织工程方法促进牙周组织再生提供理论和实验依据。 研究方法： 1、比格犬原代cDPSCs和cPDLSCs的分离、培养：拔除下颌双侧第2和第4前磨牙使用稀释克隆法培养cDPSCs和cPDLSCs，并进行克隆集落生长能力和生长曲线的检测。 2、使用cDPSCs和cPDLSCs接种于PGA纤维支架材料构建组织工程化韧带，并观察细胞与支架材料的生物相容性。 3、制备犬的急性一壁牙周缺损模型，于犬下颌第3前磨牙近远中侧和第1磨牙的近中侧，使用器械制备出（5mm*5mm）大小的一壁牙周缺损，实验分为2组实验组和2组对照组，实验组A：cDPSCs-PGA+β-TCP混合骨材料；实验组B：cPDLSCs-PGA+β-TCP混合骨材料；对照组A：单纯β-TCP混合骨材料组；对照组B：空白组（无植入物）。3个月后取得下颌骨标本，采用平行投照的方法拍摄根尖X线片，脱钙后制作组织病理切片，通过对实验牙及牙周组织的HE染色和AZAN染色，观察牙周组织的愈合情况，所有数据图片通过photoshop软件测量术后牙周再生相关指标的数据结果，并使用SPSS软件进行统计学的单因素方差分析。 实验结果： 1、cDPSCs和cPDLSCs原代细胞的分离和培养结果：酶消化法分离cDPSCs和cPDLSCs3天后可观察到cDPSCs和cPDLSCs的克隆样贴壁生长。cDPSCs和cPDLSCs的增殖生长曲线结果符合细胞对数生长曲线，呈明显的“S”形。cDPSCs和cPDLSCs的克隆形成能力检测中，约20％的cPDLSCs形成克隆样细胞集落，与cPDLSCs相比，cDPSCs显示出稍低些克隆形成率（17%左右），克隆集落大小未见差异。 2、cDPSCs和cPDLSCs接种到PGA支架上培养到两周，倒置相差显微镜下可观察到大多数cDPSCs和cPDLSCs黏附在PGA纤维并沿着纤维排列方向生长，分泌大量的细胞外基质，形成体外组织工程化韧带。 3、第12周时，根尖X线片示：一壁骨缺损中实验组的新骨生成明显高于对照组中的新骨生成量。组织学观察及定量分析示：新生牙骨质：cDPSC-PGA+β-TCP组、cPDLSC-PGA+β-TCP组高于β-TCP组和对照组有明显差异（p<0.05）。新生牙周膜：cDPSC-PGA+β-TCP组、cPDLSC-PGA+β-TCP组高于β-TCP组和对照组有明显差异（p<0.05）。新生骨高度：cDPSC-PGA+β-TCP组、cPDLSC-PGA+β-TCP组与β-TCP组和对照组有明显差异（p<0.05）。新生骨面积：其中cDPSC-PGA+β-TCP组、cPDLSC-PGA+β-TCP组和β-TCP组与对照组有明显差异（p<0.05）。 结论： 1、cDPSCs和cPDLSCs接种在PGA支架材料上能良好的生长和增殖，PGA支架材料具有良好的生物相容性，经力学刺激诱导后，cDPSCs和cPDLSCs联合PGA材料形成组织工程化韧带。 2、cDPSCs-PGA和cPDLSCs-PGA联合β-TCP与自体骨混合的骨材料，可以促进一壁牙周缺损中的牙周组织再生。