背景结直肠癌是世界范围内最常见的肿瘤类型之一,肝转移是结直肠癌患者的主要致死因素^[1]。目前而言初诊结直肠癌转移患者的五年生存期并没有多大改观,约10%左右,有效治疗率依旧保持在低水平^[2]。肿瘤的转移是一个多步骤的复杂过程,对肝转移的抑制是治疗结直肠癌有效的手段。大量研究表明髓系细胞广泛参与了肿瘤转移灶形成与进展,而在结直肠癌肝转移中,不同亚群的髓系细胞发挥着不同的作用^[3]。Tip-DC,分泌肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）与诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的树突状细胞（TNF-α/iNOS producing dendritic cells,Tip-DCs）,是一群表面分子表型为CD11b特殊类型的髓系细胞^[4]。前期研究发现,在结直肠癌肝脏转移灶中,机体通过趋化因子CCL2结合其受体CCR2,募集大量的CD11b⁺髓系细胞浸润。而在动物实验中,选择性的去除该群CD11b⁺髓系细胞后肝转移灶的生长明显受到抑制,一些已形成的转移灶缩小甚至消失^[5]。因此,对该群髓系细胞参与结直肠癌肝转移的研究有利于更好地了解肝转移的分子机制,为临床工作提供新的方向。进一步研究我们发现肝转移灶中CD11b⁺髓系细胞则较多存在于肿瘤浸润组织的边缘以及瘤组织的基质中^[5]。因此我们探寻从手术取下的肝转移瘤组织中,对该CD11b⁺髓系细胞进行特异分离与提取。本研究联合机械-酶消化法与流式细胞仪分选出目标细胞,并对获取的细胞进行鉴定和评价,寻求建立一种结直肠癌肝转移瘤组织中获取特异性细胞的分选方法。目的利用机械法联合化学酶消化法,从结直肠癌肝转移瘤组织中分选出高纯度CD11b⁺髓系细胞,并对该细胞的特异性进行验证,对细胞的形态和活性进行评价,从而建立稳定的可靠的从结直肠癌肝转移瘤组织中获得特异单细胞的方法。方法采用术后离体的结直肠癌肝转移瘤标本,机械联合酶消化法将实体瘤组织制备成单细胞悬液;流式细胞检测仪对各组单细胞悬液的阳性细胞的比例进行检测;利用流式细胞分选仪分选出CD11b阳性的髓系细胞,并回测细胞纯度;免疫细胞化学技术对分选出细胞的特异性进行鉴定;吉姆萨以及台盼蓝染色对分选所获得细胞进行评价。采用配对样本的t检验,对10例样本的分选前阳性率以及分选后纯度进行比较,以P<0.01为差异有统计学意义;采用单样本均数的t检验,判断本研究的10例分选纯度是否不低于一般流式分选纯度,以标准95%为已知总体的分选纯度,P<0.05/2（单侧）为差异有统计学意义。结果（1）流式细胞术能从机械联合酶消化法制备的单细胞悬液中分选出高纯度以及足够数量的CD11b阳性细胞;（2）分选前细胞阳性率与分选纯度的差异有统计学意义（P<0.01）,分选纯度达到实验研究的要求（P<0.05）;细胞免疫化学技术验证了分选细胞的特异性;（3）采用吉姆萨染色法对分选前后的细胞形态对比观察,分选前的细胞成团成块,形态各不相同,为各种细胞混合;分选后的细胞,不再成团块,形态类型相似;（4）统计分析10例样本分选前细胞阳性率与分选后细胞纯度。分选前阳性细胞率相比分选后细胞的纯度,P（0.003）<0.01,分选效果明显;分选后细胞纯度与一般流式分选纯度的差异比较,P（0.016）<0.05/2,可以认为该10例样本平均分选纯度不低于95%,从而表明所建立的方法具有良好的可重复性。结论机械联合酶消化法制备的单细胞悬液,经过流式细胞仪分选,能够分选出高纯度,活性良好,形态完整的特异性细胞,操作方法稳定可重复,满足进一步研究的要求。