研究目的:探究CD24分子在小鼠胆总管结扎（BDL）模型所模拟的胆汁淤积性肝纤维化疾病中的作用及其相关分子机制。研究内容与方法:一、观察CD24分子在小鼠BDL模型所致肝纤维化中的作用。分别构建野生型（WT）小鼠与CD24敲除(CD24^-/-)小鼠的BDL模型与假手术组（Sham）,在造模后第7天处死。H&E染色观察肝组织损伤变化与炎症状态;血清学谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）显示肝功能变化;天狼猩红（Sirius Red）染色显示肝组织纤维化程度;Western-blot检测肝组织中CD24与α-SMA的蛋白水平表达变化,Real-time PCR检测肝组织中纤维化相关指标以及CD24的mRNA表达变化。二、解析CD24分子在小鼠BDL模型肝脏中对巨噬细胞的调节作用BDL造模后第7天,使用免疫荧光检测肝组织中巨噬细胞与纤维化关系;利用流式细胞术分析不同基因型小鼠造模后肝脏中定居型巨噬细胞(CD11bⁱntnt F4/80^hi)、募集型巨噬细胞(CD11b^hiF4/80^intLy6C^hi/lo)的比例与数量变化,并通过CCR2与CX₃CR1的mRNA表达验证流式结果;使用Ki67染色确定定居型巨噬细胞、募集型巨噬细胞原位增殖的水平;流式分析不同巨噬细胞亚群CD24分子的表达情况并检测造模前后CD24分子的变化。三、探讨CD24分子在小鼠BDL模型中通过巨噬细胞调节肝纤维化的分子机制Real-time PCR技术检测造模后小鼠肝组织TGF-β1 mRNA表达变化;利用细胞因子内染色并进行流式细胞术检测,分析不同巨噬细胞亚群TGF-β1分泌情况,以及M1巨噬细胞标志物iNOS、M2巨噬细胞标志物CD206表达情况;通过提取巯基乙酸盐肉汤诱导的不同基因型小鼠炎性腹腔巨噬细胞,并将其同肝星状细胞培养,分析肝星状细胞的活化情况并ELISA检测上清中TGF-β1含量,确定CD24、巨噬细胞、TGF-β1间的关系。研究结果:小鼠BDL造模后第7天,肝组织CD24的mRNA与蛋白水平表达升高。H&E、Sirius染色以及血清中ALT、AST含量检测结果显示,造模后CD24^-/-小鼠较WT小鼠肝脏损伤与纤维化程度加重;而CD24^-/-小鼠肝组织纤维化相关基因α-SMA、Col1a1、Timp-1在第7天时也明显高于WT小鼠。免疫荧光显示造模后肝脏中F4/80与α-SMA的表达具有相关性。CD24^-/-小鼠的F4/80、α-SMA表达显著高于WT小鼠。流式细胞术检测显示造模后第7天小鼠肝脏中CD11b^intF4/80^hi/int巨噬细胞的比例与数量均无明显变化,而CD24^-/-小鼠中募集型巨噬细胞中Ly6C^lo亚群比例与数量显著高于WT小鼠。检测肝组织中CCR2与CX₃CR1的mRNA表达发现,CCR2的mRNA表达在造模前后没有明显的变化,而CD24^-/-小鼠CX₃CR1的mRNA表达显著高于WT小鼠。进一步的细胞增殖染色显示,造模后CD24^-/-小鼠的募集型Ly6C^lo巨噬细胞的Ki67阳性率明显高于WT小鼠,而其他巨噬细胞亚群基因型之间无明显差异。流式细胞术检测各亚群巨噬细胞CD24表达变化,结果发现募集型Ly6C^lo巨噬细胞表达CD24水平最高,并且造模前后该亚群巨噬细胞中CD24^int巨噬细胞的CD24表达明显升高,而CD24^hi巨噬细胞CD24表达无明显变化。流式检测造模后各亚群巨噬细胞M1型/M2型的分化程度,结果显示CD24^-/-小鼠中募集型Ly6C^lo巨噬细胞CD206的阳性率高于WT小鼠,其他巨噬细胞亚群CD206的阳性率无明显差异,此外各亚群巨噬细胞在造模后第7天低表达iNOS,并且基因型之间无差异。Real-time PCR结果显示,造模后第7天CD24^-/-小鼠肝组织中TGF-β1表达显著高于WT小鼠,流式细胞内染色结果显示,造模后三种不同亚群的巨噬细胞均表达TGF-β1,其中募集型Ly6C^lo的TGF-β1阳性率最高,并且CD24^-/-小鼠中该亚群巨噬细胞的TGF-β1阳性率高于WT小鼠。WT/CD24^-/-小鼠腹腔巨噬细胞同WT小鼠肝星状细胞共培养实验结果表明,CD24^-/-组的巨噬细胞诱导肝星状细胞活化更为明显,其上清中TGF-β1的含量明显多于WT组,并且CD24^-/-组巨噬细胞表达TGF-β1的水平高于WT组。结论:CD24分子可能主要通过限制募集的Ly6C^lo巨噬细胞在肝内的增殖并减少其向M2型巨噬细胞极化,导致肝内巨噬细胞TGF-β1分泌减少,间接抑制肝星状细胞的活化,从而减轻了胆汁淤积诱导的肝纤维化。