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背景:脓毒症是一种由感染引起的全身炎症反应综合征,是重症医学面临的主要难题之一。40%的脓毒症患者合并有心肌损伤及心功能障碍,其死亡率高达70%。最近的研究表明,脓毒症心肌损伤与肾素-血管紧张素(RAS)系统功能异常有关。Alamandine作为血管紧张素1-7家族的新成员,是一个重要的生物活性肽。研究发现,Alamandine可舒张血管、降低血压、抑制心肌细胞纤维化、抑制炎症反应及细胞凋亡。然而,Alamandine能否在脓毒症心肌损伤病理过程中发挥作用尚未见研究报道。目的:探索在脂多糖(LPS)诱导的脓毒症心肌损伤模型中,Alamandine对心脏功能、心肌炎症反应及心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:1.取C57雄性小鼠48只,随机分为6组:生理盐水(NS)组、LPS组、0.01u M/kg Ala+LPS组、0.1u M/kg Ala+LPS组、1 u M/kg Ala+LPS组、10 u M/kg Ala+LPS组。分别经尾静脉注射生理盐水或Alamandine(0.01、0.1、1.0、10 u M/kg),1h后腹腔注射LPS(10mg/kg),12h后,用Elisa法检测各组小鼠血清中炎症因子TNF-α及IL-1β的表达情况,评估Alamandine的最佳实验剂量。2.取C57雄性小鼠32只,随机分为4组:NS组、LPS组、Ala组、Ala+LPS组。分别经尾静脉注射生理盐水或Alamandine(1.0 u M/kg),LPS处理同上,12h后行小鼠超声心动图检查,计算心脏射血分数(EF值)及左室短轴缩短率(FS值);经尾动脉监测小鼠血压;杀鼠取材,行心肌组织TUNEL染色及免疫荧光染色;运用Western Blot,RT-PCR法检测心肌组织损伤指标(α-MHC、β-MHC、S100A8、S100A9)、凋亡指标(C9,Bcl2,Bax)及自噬指标(LC3-I、LC3-II、Atg3、Atg5)的表达情况。3.细胞分为磷酸盐缓冲溶液(PBS)组、LPS组、Ala组、Al+LPS组,分别予NS或Alamandine(1ug/ml)预处理,30min后予LPS(100 ng/ml)处理,12h后检测心肌细胞炎症、凋亡、自噬指标(同上)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族成员(ERK、JNK、P38)的修饰与表达情况。4.细胞分为PBS组、LPS组、db-c AMP(双丁酸环腺苷酸)组、Ala+LPS组、db-c AMP+Ala+LPS组。予db-c AMP(10u M/ml)对细胞行预处理,30min后,予Alamandine及LPS处理(同上),12h后检测心肌细胞损伤指标(同上)及MAPKs家族成员的修饰与表达情况。结果:1.小鼠血清的Elisa结果显示:与LPS组相比,Alamandine(0.1、1.0、10u M/kg)可抑制炎症因子的表达;同时,1.0 u M/kg为Alamandine的最佳动物实验剂量。2.小鼠超声心动图显示:与NS组相比,LPS组心功能明显下降,EF值(60.7±1.4%VS 35.1±5.8%)及FS值(31.9±0.9%VS 13.3±2.6%)显著降低(P<0.05);而与LPS组相比,Ala+LPS组心功能显著改善,EF值(35.1±5.8%VS43.9±4.2%)及FS值(13.3±2.6%VS20.0±2.7%)显著升高(P<0.05)。3.小鼠血压检测显示:Alamandine并不会加重脓毒症小鼠低血压风险(LPS组VS Ala+LPS组,P>0.05)。4.在动物试验中,与NS组相比,LPS组小鼠心肌损伤、细胞凋亡、自噬作用明显加重;与LPS组相比,Ala+LPS组小鼠的心肌损伤、细胞凋亡、自噬作用皆得到缓解。5.在细胞实验中,与LPS组相比,Ala+LPS组心肌细胞的炎症反应、凋亡、自噬过程皆得到有效控制。6.检测MAPKs家族成员ERK、JNK、P38的表达及修饰情况,结果提示:ERK、JNK、P38的磷酸化水平在LPS组中显著升高(VS NS组,P<0.05);而Ala+LPS组中,其磷酸化水平则显著降低(VS LPS组,P<0.05);然而db-c AMP的应用则可拮抗Alamandine的抑制作用,提升ERK、JNK、P38的磷酸化水平(Ala+LPS组VS db-c AMP+Ala+LPS组,P<0.05)。结论:1.Alamandine可抑制LPS导致的心肌组织炎症反应及自噬凋亡过程;2.Alamandine可改善LPS导致的小鼠心功能障碍及心肌损伤;3.Alamandine可通过调节MAPKs信号通路分子的磷酸化来改善脓毒症心肌损伤。