论文部分内容阅读
目的失血性休克复苏后免疫系统的变化对后续的治疗具有重要的指导意义。因此我们建立大鼠失血性休克模型,并分别利用生理盐水(NS),高渗氯化钠(HTS)和羟乙基淀粉(HES)进行早期液体复苏,利用流式细胞技术观察不同液体复苏后对外周血和脾脏中Treg, Th1/Th2, Tc1/Tc2早期(复苏后2.5h)的干预作用,以评估上述3种液体对机体免疫系统的影响。方法利用颈动脉可控性放血方法制作大鼠失血性休克模型,并模拟急救流程将实验分成失血期,早期液体复苏期,输血期和观察期四个阶段。根据早期液体复苏期给予的液体不同分为NS组,HTS组和HES组,另外再设假手术(sham)组和对照(control)组,每组7只大鼠。假手术组只接受与各液体复苏组相同的麻醉、颈动脉和股静脉置管以及肝素化操作,没有放血和补液补血步骤,对照组仅接受麻醉操作,无动静脉置管及其他操作,两组观察时间与各补液组模型持续的总时间相同。输血完成后在严密血流动力学监护下观察2h后,直接颈动脉抽血处死各组大鼠,对照组心脏穿刺抽血处死。无菌分离并获取外周血单核细胞和脾细胞悬液,利用3色荧光流式技术检测其中(CD4+CD25+Foxp3+) Treg数量变化。将外周抗凝血和脾细胞悬液分别加入到含有佛波酯(PMA)、离子霉素(Ionomycin)、莫能霉素(Monensin)和胎牛血清的RPMI1640培养基中,37℃,5%CO2培养4h,3色荧光流式技术检测外周血和脾脏Th1/Th2, Tc1/Tc2的变化。结果1.动物实验模型的建立成功建立分别采用NS, HTS和HES进行早期液体复苏的大鼠失血性休克模型,3种液体复苏均可立即产生有效的复苏作用,迅速提高平均动脉压(MAP),改善血流动力学状态,并维持其基本稳定至观察期结束。2.不同实验组外周血和脾脏Treg检测结果外周血中,与control组相比,sham组Treg含量升高,差异有统计学意义(P=0.031)。NS, HTS和HES分别复苏后早期外周血Treg含量相近,差异没有统计学意义(P>0.05),但它们均低于control和sham组,差异均有统计学意义(与control相比：P=0.023,0.02,0.032；与sham相比3组均P<0.001)。脾脏中,与control组相比,sham组Treg水平略低,差异没有统计学意义(P>0.05)。HTS组脾脏中Treg的含量与control相近,差异没有统计学意义(P>0.05)。NS和HES组脾脏Treg的含量低于control组,差异有统计学意义(P=0.0.32,P=0.028)。sham组的Treg低于HTS组,高于NS和HES组,差异没有显示出统计学意义(P>0.05)。3.不同实验组外周血和脾脏Th1/Th2, Tc1/Tc2检测结果外周血Th1,Th2细胞方面,sham组与control组相比差异没有统计学意义(P>0.05)。与control和sham组相比,NS、HTS和HES组Th1/Th2均降低,但与control组的差异没有统计学意义(P>0.05),与sham组的差异具有统计学意义(P=0.012,0.025,0.008)。外周血Tc1, Tc2细胞方面,sham组与control组没有统计差异(P>0.05)。与control和sham组相比,只有HTS组Tc1/Tc2有升高趋势,但没有统计学差异(P>0.05),NS和HES组Tc1/Tc2没有观察到明显的变化趋势(P>0.05)。脾脏Th1, Th2细胞方面,sham组与control组相比Th1/Th2升高,差异有统计学意义(P=0.016)。与control组相比,HTS组Th1/Th2明显升高,差异有统计学意义(P<0.001),HES组Th1/Th2也有升高趋势,差异有统计学意义(P=0.047),NS组Th1/Th2无明显变化,差异没有统计学意义(P>0.05)。与sham组相比,HTS有升高趋势,HES组无明显变化,差异都没有统计学意义(P>0.05),NS组显著降低,差异有统计学意义(P=0.012)。脾脏Tc1, Tc2细胞方面,sham组与control组相比差异没有统计学意义(P>0.05)。与control和sham组相比,HTS组Tc1/Tc2显著升高,差异均有统计学意义(P<0.001,P=0.002),NS和HES组Tc1/Tc2没有观察到明显的变化趋势(P>0.05)。结论失血性休克后,与NS和HES复苏相比,HTS复苏后早期(约2.5h)脾脏Treg, Th1/Th2和Tcl/Tc2即可出现明显变化,Treg数量升高,淋巴细胞向Th1和Tc1分化的能力相对增强,表明HTS对脾脏免疫反应的影响更快更明显,但须进一步的研究以观察此种效应对机体免疫反应影响的程度和利弊。