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类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一类发病机制不明确的自身免疫性疾病,其发病缓慢,滑膜呈肿痈样增生,形成血管翳,造成软骨和骨的破坏。RA在中医上属于“痹证”的范畴,在中医基础上治疗RA的历史久远,其中青风藤是治疗的首选药,它具有祛风通络引经,治疗风湿痹痛,直达病所。青藤碱(sinomenine, SIN)是青风藤中常被人们研究的主要活性有效成分,青藤碱具有镇痛、抗炎、降血压、免疫调节等作用。近些年来对青藤碱的研究较多,而青风藤95%醇提物对RA治疗效果却只有很少的研究。目的：本研究以抑制滑膜增生以及骨的破坏为调节核心,对青风藤95%醇洗脱物治疗RA进行体内、体外研究,运用理论和技术的更新,了解相关的机制,探索青风藤醇提物治疗类风湿关节炎的优势,指导临床合理用药。观察青风藤通过大孔树脂洗脱得到的95%乙醇洗脱物对胶原诱导性关节炎大鼠(collagen induced arthritis, CIA)的疗效,进一步将青风藤95%醇洗脱物与青藤碱单体对类风湿性关节炎的疗效做一个比较,同时以FLS和PBMC作为一个靶点来初步探讨可能的作用机制。方法：1、有效部位的分离1.1将青风藤的根茎用粉碎机粉碎,大约用8倍药量的95%乙醇回流总提取2次,每次沸腾后约2 h,再合并两次的提取液,用旋转蒸发仪真空蒸发至稠浸膏状,加入蒸馏水稀释,制成青风藤的混悬液。1.2用不同浓度的乙醇通过AB-8大孔树脂对青风藤混悬液进行洗脱,得到不同浓度的乙醇洗脱物。再运用HPLC测定不同浓度的乙醇洗脱物中青藤碱的含量。2、体内实验2.1使用牛Ⅱ型胶原诱导的SD大鼠关节炎(CIA)模型,造模成功的随机分为4组,剩余的为空白对照组：(1)模型组(MODEL,n=9);(2)青风藤醇洗脱物高剂量组(High does QFT, H-QFT,n=9);(3)青风藤醇洗脱物低剂量组(Low dose QFT, L-QFT, n=9);(4)青藤碱组(SIN, n=9);(5)空白对照组(CONTROL, n=10),2.2 H-QFT组(120mg/kg/d灌胃2m1)、1-QFT组(60mg/kg/d灌胃lml+生理盐水1m1)、SIN组(正清风痛宁120mg/kg/d灌胃2m1)、模型组(生理盐水灌胃2m1)、空白对照组(生理盐水灌胃2m1)。2.3采用关节评分法对大鼠关节两个记录员每隔三天进行关节指数(AI)评分,同时观察大鼠的关节炎症状态。2.4 ELISA试剂盒测定大鼠血清中IL-17、OPG、RANKL的表达水平。3、体外实验3.1取进行关节置换术RA患者的滑膜组织分离培养成纤维样滑膜细胞(FLS)和从提取健康人的外周血单核细胞(PBMC)进行细胞培养。3.2用Methyl thiazolyl tetraolium法(MTT)检测不同药物对FLS和PBMC增殖情况增殖的影响。3.3用RT-PCR的方法检测FLS中RANKL中的mRNA表达水平。3.4用TRAP染色法观察药物对于OC分化的影响3.5用RT-PCR的方法检测不同药物对PBMC中OC分化转录因子NFATcl的mRNA表达水平。结果：1、有效部位的分离1.1方法学的建立：λ=262nm,柱温：30℃,流动相：水(用磷酸及三乙胺调整PH至7.8)—乙腈(40：60)。1.2含量的测定：QFT的95%乙醇洗脱物与SIN的出峰时间及含量相似。2、体内试验造模后大鼠关节炎肿胀程度在第21d出现第一个高峰,在第36d左右会出现第2个炎症高峰。造模成功大鼠36只,按关节炎指数(AI)评分为H-QFT组、L-QFT组、SIN组、MODEL组,每组9只。2.1 H-QFT组、L-QFT组以及SIN组大鼠体重均得到不同程度的控制。2.2 H-QFT组、L-QFT组以及SIN组与MODEL组相比能显著抑制大鼠关节肿胀(P<0.05)。2.3 H-QFT组IL-17水平显著低于MODEL组(P<0.05)。2.4 H-QFT组显著下调RANKL水平(P<0.05),H-QFT组、L-QFT组以及SIN组均能够上调OPG水平(P<0.05)。3、体外实验3.1取进行关节置换术的RA患者的滑膜组织分离培养FLS,选取培养至3-5代的细胞用于实验,此时的细胞形态较好,增值速度快。3.2不同药物组处理细胞24h后,其中H-QFT组的细胞抑制率与对照组比较有显著差异(P<0.05)。3.3 REAL-TIME PCR检测48h不同药物组对PBMC细胞RANKL、OPG表达的影响,H-QFT组与其它组相比能够显著降低RANKL的表达,上调OPG表达。结论：1、有效部位分离：加8倍体积的95%的乙醇提取2h,所得出的青藤碱含量最高。2、体内实验：H-QFT组能够显著缓解大鼠的关节肿胀、降低IL-17的分泌水平,更好的发挥抗炎作用,进一步有效的抑制炎症；同时能够降低RANKL表达提高OPG水平,与其他组比有显著性差异(P<0.05)。3、体外实验：H-QFT组显著抑制RA滑膜细胞的增殖,还能显著抑制RANKL的中mRNA的表达；NFATc1是破骨细胞分化的启动因子,对其基因的表达量进行测定,加入了药物后可以抑制RANKL对NFATc1的基因的表达量,从而抑制OC的分化,进一步防止骨的破坏。