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旋毛虫病是一种由旋毛虫（Trichinella spiralis）感染引起的食源性人畜共患寄生虫病,严重危害人类健康。旋毛虫入侵宿主后通常可诱发宿主强烈的Th2型免疫反应、Treg细胞数量增加、巨噬细胞选择性活化（M2）、DC细胞不完全成熟,伴有免疫抑制因子（IL-10、TGF-β）表达增加,创造一个有效的抗炎环境,这种抗炎环境能确保其成功寄生并在宿主体内长期生存。蠕虫感染后,M2型巨噬细胞亚群通过限制炎性反应来保护宿主,并在感染后完成组织修复和重塑,或通过抑制Th1反应,诱导Th2反应来促进驱虫作用。先前的实验已证实感染旋毛虫后,旋毛虫及其ES产物、旋毛虫关键免疫调节因子可诱导M2型巨噬细胞,这表明旋毛虫可以通过改变巨噬细胞的活性来调节宿主免疫反应。胞外囊泡（Extracellular Vesicles,EVs）作为寄生虫和宿主之间相互作用的新模式,可通过其携带的活性物质调控受体细胞的功能。但迄今为止旋毛虫胞外囊泡（Ts-EVs）是否可以调节巨噬细胞激活及其作用机制仍不清楚。本课题旨在研究Ts-EVs在体外和体内对巨噬细胞极化的影响,为探索旋毛虫的免疫调节机制提供新的思路。首先,通过超速离心法分离纯化了Ts-EVs,透射电子显微镜（TEM）下观察到获得的Ts-EVs呈双分子囊泡状结构,纳米颗粒跟踪分析（NTA）表明,Ts-EVs粒径主要分布于90-210 nm之间,粒径主峰为162 nm,Western blot鉴定显示Ts-EVs表达EVs特异性标记蛋白CD63、烯醇化酶（Enolase）和热休克蛋白70（Hsp70）。综上所述,我们已成功获得Ts-EVs,并可用于功能鉴定。其次,为了确定Ts-EVs对宿主免疫细胞的影响,本研究分别将15μg和30μg Ts-EVs尾静脉注射给C57BL/6小鼠,12 h后分离外周血免疫细胞,结果表明Ts-EVs显著降低单核巨噬细胞的数量。因此,本研究进一步探讨Ts-EVs在巨噬细胞极化中的调节作用。分离小鼠骨髓源巨噬细胞（BMDMs）,用含10%FBS的RPMI 1640培养得到M0型巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞表面标记物F4/80,鉴定纯度达90%以上。体外将Ts-EVs（5μg/m L）作用于BMDMs,24 h后收集BMDMs。Western blot结果表明,Ts-EVs刺激组与Control组相比,可显著促进Arg-1的表达,同时通过格里斯试剂（Griess）检测到NO的产生降低。q RT-PCR检测结果表明,Ts-EVs刺激组TNF-α、IL-1β、IL-17A转录水平下调显著,IL-10、TGF-β、IL-4转录水平上调显著,同时可诱导Arg-1、FIZZ1、Ym1表达,降低i NOS表达。进一步通过Western blot检测JAK1/STAT3/STAT6通路的磷酸化水平,结果发现,与Control组相比,Ts-EVs组p-JAK1、p-STAT3、p-STAT6表达显著增加,表明Ts-EVs通过JAK1/STAT3/STAT6信号通路来诱导BMDMs向M2极化。我们推测Ts-EVs可以抑制促炎细胞因子的产生,诱导M2型巨噬细胞标志物Arg-1、FIZZ1和Ym1的表达,从而抑制M1型巨噬细胞极化,促进M2型巨噬细胞极化,在巨噬细胞水平调节宿主免疫反应,从而有利于旋毛虫的寄生。最后,本研究利用DSS诱导小鼠实验性结肠炎（DSS-IBD）,研究Ts-EVs对体内巨噬细胞极化的影响。Ts-EVs预处理方式如下:将Ts-EVs（50μg/只）腹腔注射到C57BL/6小鼠体内,然后给予含3%DSS的水。每天观察并记录C57BL/6小鼠体重和粪便情况,造模第7天处死C57BL/6小鼠。体重、DAI、结肠长度和结肠宏观评分结果表明,Ts-EVs可预防DSS-IBD的临床症状。H&E染色、PAS染色和MPO活性分析结果表明,Ts-EVs可预防DSS-IBD的组织损伤。采用q RT-PCR和ELISA检测各细胞因子在结肠中的表达,结果发现DSS组炎性因子表达增加,而提前腹腔注射Ts-EVs能够抑制DSS结肠中炎性因子的增加。提示Ts-EVs可通过调节小鼠结肠炎性因子的分泌,有效干预DSS-IBD的进展。免疫组织化学分析Ts-EVs对结肠巨噬细胞极化的影响,发现各组结肠均有F4/80+巨噬细胞浸润,DSS+Ts-EVs组结肠组织F4/80+CD11c+巨噬细胞（M1型巨噬细胞）浸润水平低于DSS组,与Control组相比,Ts-EVs组结肠组织的F4/80+CD206+巨噬细胞（M2型巨噬细胞）浸润水平明显升高,进一步流式细胞术观察Ts-EVs对巨噬细胞极化的影响,结果发现,各组肠系膜淋巴结中均有F4/80+细胞,DSS+Ts-EVs组肠系膜淋巴结CD16/32+巨噬细胞（M1型巨噬细胞）数量显著低于DSS组,Ts-EVs组肠系膜淋巴结的CD206+巨噬细胞（M2型巨噬细胞）数量显著高于Control组,这表明Ts-EVs可以抑制巨噬细胞向M1极化来缓解结肠炎。总之,本研究表明Ts-EVs抑制M1型巨噬细胞极化,诱导巨噬细胞向M2表型转换,并通过调节巨噬细胞极化来影响DSS诱导的结肠炎的病理过程,这为研究旋毛虫与宿主免疫系统之间相互作用提供实验基础和理论依据。