ABA响应基因AtDQL参与调控拟南芥种子萌发

来源 :东北师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:peter_wan
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种子的萌发过程,于种子植物来说,是生命历程开始,生活周期第一步。种子的萌发过程,是一个复杂的过程。受两方面的调控,内部和外部因素。光照、水分、氧气、温度、盐胁迫、病虫害的侵染等外部因素,都能影响种子的萌发过程;植物激素,影响种子萌发、关键的内在因素。很多植物激素都能影响种子萌发,如水杨酸、乙烯、细胞分裂素、脱落酸等,其中脱落酸(abscisic acid, ABA)和细胞分裂素(gibberellins, GAs)起主要作用。两种植物激素,即ABA和GAs,调控种子萌发时,作用刚好相反。当ABA含量高,GAs含量较低时,有利于种子休眠;当ABA含量较低,GAs含量较高时,有利于种子萌发。参与ABA信号转导的蛋白包括PYLs (PYR/PYL/RCARs), PP2Cs (protein phosphatase 2C) 和 SnRK2s (Sucrose non-fermenting 1-related protein kinase 2s)等。在ABA含量较低时,PYLs不能与PP2Cs结合,因此PP2Cs与SnRK2s结合并抑制其活性,ABA响应基因的表达受阻;在ABA含量较高时,ABA与PYLs结合,形成的复合体再与PP2Cs结合,解除PP2Cs对SnRK2s抑制作用,SnRK2s通过自身的磷酸化作用调控ABA响应基因的表达。SnRK2s也能够通过调控离子通道蛋白SLAC1 slow anion channel1)和KAT1 (K+ channel in Arabidopsis thalianal)的磷酸化从而调控气孔运动。在拟南芥中,合成ABA的关键酶NCEDs (Nine-cis-epoxycarotenoid dioxygenases)在种子干燥期含量较高,可使ABA快速积累。因此,ABA响应基因ABI5(ABA insensitive5),被诱导表达,进而对种子萌发,起到抑制作用。当外界条件适宜时,干种子开始吸胀吸水,种子萌发过程启动,降解ABA的关键酶CYP707As(Cytochrome P450, Family 707, Subfamily A, Polypeptides)大量表达,ABA含量下降,ABI5的表达量也随之降低。ABI1和ABI2是PP2C家族蛋白,在ABA含量较低时能够与SnRK2s结合,从而抑制了SnRK2s对其靶基因ABI5等的激活作用。在找寻新的功能未知的ABA响应基因的过程中,我们发现AtDQL(Arabidopsis thaliana Dong Qiu Li)的表达受ABA诱导。为了进一步研究AtDQL的功能,我们通过筛选鉴定获得了AtDQL基因的突变atdql,通过基因克隆的方法,构建了35S:AtDQL载体,转化野生型拟南芥,再经过筛选,获得过表达植株。利用突变体、过表达植株以及野生型Col(Columbia)等种子的萌发实验结果表明:在萌发过程中,与野生型相比,突变体atdql种子,对ABA的敏感性,明显降低,而过表达植株,结果则相反。RT-PCR检测结果表明调控种子萌发的关键基因ABI5的转录水平在过量表达植株中明显上升,而在突变体中明显降低。而利用原生质体转染的检测结果则表明AtDQL具有转录抑制活性。这些结果说明,转录抑制子AtDQL,在种子萌发过程中,使ABI5的表达提高,从而抑制萌发过程。
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