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背景:重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是临床常见急危重疾病。最初认为,病程中胰腺及其他器官所释放的炎症介质决定了胰腺炎的进展。近来研究发现,在胰腺炎症发生时,巨噬细胞凋亡与其病情严重程度呈负相关,巨噬细胞凋亡是一种保护现象。因此,研究巨噬细胞凋亡细胞凋亡的机制并使用药物诱导其凋亡具有重要意义。目的:重症急性胰腺炎已严重危及人类生命,常伴有全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、严重感染、休克、多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS),导致病人死亡。研究发现巨噬细胞在重症急性胰腺炎病理生理过程中起了重要作用。本研究旨在探讨氯膦酸二钠脂质体的制备和其对SAP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响。方法:利用薄膜法制备氯膦酸二钠脂质体(Clodronate-liposome,LC)。8只SD大鼠用5%牛磺胆酸钠胰包膜下注射制备SAP模型。制模成功后,取肺泡灌洗液,经差时贴壁法,分离、纯化肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AM),并进行原代培养,分别取5孔分为SAP对照组、SAP+空白脂质体组(50μl,100μl)、SAP+氯膦酸二钠脂质体组(50μl,100μl)。经不同剂量的空白脂质体及氯膦酸二钠脂质体(50、100μl)作用,在24孔及96孔培养板中共培养,然后采用MTT法检测氯膦酸二钠脂质体对肺泡巨噬细胞增殖的影响,苏木精、吖啶橙荧光染色观察肺泡巨噬细胞凋亡的形态学变化并计算凋亡率。结果:所制备的脂质体直径约100至200nm,氯膦酸二钠包裹率为5.8%,透射电镜检查见其大小均匀。获得的肺泡巨噬细胞形态正常,经台盼蓝染色,细胞存活率＞95%,瑞氏染色法鉴定纯度＞90%。空白脂质体组肺泡巨噬细胞凋亡无明显差异;不同剂量氯膦酸二钠脂质体的干预下:MTT结果显示于SAP对照组比较SAP+空白脂质体组(50μl,100μl)对肺泡巨噬细胞凋亡无显著差异(P＞0.05);SAP+氯膦酸二钠脂质体组(50μl)有显著性差异(P＜0.05),(100μl)时亦有显著性差异(P＜0.01)。肺泡巨噬细胞的吸光度值随药物作用时间和剂量的增加而减低,提示生长受到明显抑制(P＜0.01或P＜0.05),光镜可观察到细胞凋亡的形态学变化,空白脂质体组凋亡率未见明显差异,不同剂量氯膦酸二钠脂质体的干预下凋亡率随药物作用时间和剂量的增加而增加(P＜0.01)。AM凋亡百分率分别为:SAP对照组(2.08±0.73)%,SAP+空白脂质体组(3.25±0.52%,3.66±051%),SAP+氯膦酸二钠脂质体组(20.17±1.72%,25.08±1.31)%,差异有显著性(P＜0.01)。结论:利用薄膜法制备LC操作简单,方法易于掌握,我们在实验中成功制备出了氯膦酸二钠脂质体,通过透射电镜发现其大小均匀,包裹率较高。在本实验中,我们发现,脂质体包裹氯膦酸二钠可以诱导大鼠肺泡巨噬细胞凋亡。本实验为SAP的临床治疗提供了新的理论依据。