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目的本研究采用了复合因素造模法配合慢性应激建立肝郁脾虚型慢性萎缩性胃炎（CAG）大鼠模型,从Hedgehog信号通路探讨肝郁脾虚型CAG的生物学基础,初步明确柴芍六君汤治疗肝郁脾虚型CAG的作用机制。方法5-6周龄SPF级Wistar雄性大鼠（110±10g）52只,采用随机数字表法分为2组,正常组10只、造模组42只。正常组不给予任何处理,造模组每日予以0.1%氨水和20mmol/L去氧胆酸钠交替饮用进行化学诱导,并配合饥饱失常（2日足食,1天禁食）,每日慢性束缚3h,夹尾1h,连续造模16周。随机选取正常组和造模组各2只大鼠观察胃黏膜组织病理形态。根据大鼠的一般形态、行为学实验以及胃黏膜组织病理形态来判定造模是否成功。将造模成功的大鼠随机分为模型组、维酶素组(2.4g·kg-1·d-1)、柴芍六君汤组(5.1g·kg-1·d-1)、Hedgehog阻滞剂（GDC-0449）组(50mg·kg-1·d-1)、柴芍六君汤加GDC-0449组(5.1g·kg-1·d-1加50mg·kg-1·d-1),并以正常组作为对照,给予相应剂量药物干预,模型组、正常组予等体积的灭菌饮用水,连续干预4周。采用苏木素-伊红（HE）染色观察胃黏膜组织形态,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中白介素-1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量,实时荧光定量PCR法（q-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检测大鼠胃黏膜组织Shh、Ptch1、Gli1的mRNA和蛋白的表达水平。结果1.模型评价结果:16周造模结束后,造模组与正常组比较可见大鼠毛发质地硬且发色枯黄,蓬松无光泽,懒动扎堆,神态疲倦,体重增长缓慢,大便稀薄味臭;旷场实验穿越方格数与直立次数明显减少,强迫游泳实验静止时间明显增多。光镜下观察胃黏膜组织固有腺体萎缩,腺体减少,大量炎性细胞和淋巴细胞浸润,细胞核深染,主、壁细胞减少,黏膜肌层增厚,可见肠上皮化生。2.各组药物干预后各项指标变化:（1）生理表征比较:正常组大鼠活泼好动,十分机敏,毛发洁白有光泽,大便形状正常、气味淡;模型组大鼠神态疲倦,扎堆明显,反应迟钝,毛发枯黄无光泽,大便质地软,色偏黄味臭。与模型组大鼠比较,维酶素组大鼠精神状态有所好转,毛发蓬松少有光泽,大便质地转硬,气味稍臭;柴芍六君汤组大鼠精神恢复,活泼好动,毛发淡黄稍有光泽,大便稍有正常;GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组大鼠情况并无好转。（2）体质量情况比较:与正常组比较,模型组体质量增量显著增长（P＜0.01）;与模型组比较,维酶素组、柴芍六君汤组体质量增量显著增长（P＜0.01）,GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组差异无统计学意义（P＞0.05）;与柴芍六君汤组比较,维酶素组体质量增量差异无统计学意义（P＞0.05）,GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组体质量增量显著降低（P＜0.01）。（3）行为学实验情况比较:与正常组比较,模型组旷场实验穿越方格数与直立次数显著减少（P＜0.01）,旷场实验洗脸修饰次数差异无统计学意义（P＞0.05）;与模型组比较,维酶素组、柴芍六君汤组旷场实验穿越方格数与直立次数显著增加（P＜0.01）,旷场实验洗脸修饰次数差异无统计学意义（P＞0.05）;GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组旷场实验穿越方格数、直立次数与洗脸修饰次数差异无统计学意义（P＞0.05）;与柴芍六君汤组比较,维酶素组穿越方格数、洗脸修饰次数差异无统计学意义（P＞0.05）,直立次数明显降低（P＜0.01）;GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组穿越方格数、直立次数明显降低（P＜0.01）,洗脸修饰次数差异无统计学意义（P＞0.05）;与正常组比较,模型组强迫游泳实验静止时间显著增多（P＜0.01）;与模型组比较,维酶素组、柴芍六君汤组强迫游泳实验静止时间显著降低（P＜0.01）,GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组强迫游泳实验静止时间差异无统计学意义（P＞0.05）;与柴芍六君汤组比较,维酶素组静止时间差异无统计学意义（P＞0.05）,GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组静止时间显著增多（P＜0.01）。（4）胃黏膜组织病理形态比较:正常组腺体和细胞排列整齐且结构完整,无炎性浸润,这是胃黏膜组织正常病理学表现。模型组大鼠腺细胞减少,腺体萎缩,腺腔体积增大,主、壁细胞大量减少,可见中性粒细胞和浆细胞浸润,伴有肠上皮化生,这说明大鼠CAG模型构建成功。经过治疗后,维酶素组、柴芍六君汤组细胞排列较为整齐,腺体萎缩改善,炎性浸润稍微改善,主、壁细胞有所增加,GDC-0499组和柴芍六君汤加GDC-0449组并无改善。（5）血清中炎症因子比较:与正常组比较,模型组大鼠IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,维酶素组IL-6、TNF-α显著降低（P＜0.01）,维酶素组IL-1β含量有下降趋势但差异无统计学意义（P＞0.05）;柴芍六君汤组IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著降低（P＜0.05、P＜0.01）,GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组IL-6、IL-1β、TNF-α含量差异无统计学意义（P＞0.05）;与柴芍六君汤组比较,维酶素组IL-6、IL-1β、TNF-α含量差异无统计学意义（P＞0.05）;GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著升高（P＜0.01,P＜0.05）。（6）Shh、Ptch1、Gli1 mRNA表达水平比较:与正常组比较,模型组大鼠Shh、Ptch1、Gli1 mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,维酶素组、柴芍六君汤组大鼠Shh、Ptch1、Gli1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.01）,GDC-0449组Shh、Gli1 mRNA差异无统计学意义（P＞0.05）,Ptch1 mRNA表达水平有所升高（P＜0.05）,但是升高水平不如治疗组;柴芍六君汤加GDC-0449组Shh、Ptch1、Gli1 mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）;与柴芍六君汤组比较,维酶素组Shh mRNA表达水平有所升高（P＜0.01）,维酶素组Ptch1 mRNA表达水平有所降低（P＜0.01）,维酶素组Gli1mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）;GDC-0449组与柴芍六君汤加GDC-0449组Shh、Ptch1、Gli1 mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）。（7）Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达水平比较:与正常组比较,模型组大鼠Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,维酶素组、柴芍六君汤组Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）,GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）;与柴芍六君汤组比较,维酶素组Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,GDC-0449组和柴芍六君汤加GDC-0449组Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）。结论1.氨水和去氧胆酸钠化学诱导为主的复合因素造模法配合慢性应激能成功建立肝郁脾虚型慢性萎缩性胃炎大鼠模型,且部分大鼠能够出现肠化生。2.肝郁脾虚型慢性萎缩性胃炎大鼠血清存在着炎症因子的过量表达,胃黏膜组织中hedgehog信号通路的异常表达,这考虑是肝郁脾虚型慢性萎缩性胃炎的生物学基础之一。3.柴芍六君汤能够通过调控Shh、Ptch1、Gli1mRNA和蛋白的表达从而降低炎症因子的表达,改善胃黏膜病理形态。