银屑病是一种常见的免疫相关性慢性炎症性皮肤病，其病程长，易复发，对患者身心健康影响很大。银屑病发病机制复杂，是环境、遗传等多因素参与的以皮肤慢性炎症为表现的皮肤病，主要由T淋巴细胞免疫介导，其中CD4+T淋巴细胞免疫功能异常尤为重要。过去的研究多认为银屑病病程中存在Th1/Th2细胞平衡的异常。近年来发现了一类CD4+T淋巴细胞的新亚群——Th17细胞，它能分泌IL-17、IL-22等细胞因子，在银屑病发病过程中起了关键性作用。Th17细胞产生IL-17A、IL-17F、IL-22，以及Th1细胞产生INF-γ、TNF-α，这些介质作用于角蛋白细胞，导致角质形成细胞激活、增殖，并产生一系列细胞因子，进一步诱导了T细胞、中性粒细胞等向表皮迁移，形成恶性循环。由此可见，Th1和Th17细胞在银屑病发病中起到了至关重要的作用。抑制Th1、Th17细胞增殖及其下游细胞因子的分泌可有效缓解银屑病。咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型是近几年来应用较广的动物模型，能快速诱导出与人类银屑病相似的皮肤表现，其临床特征、组织病理和发病分子学特征与人类银屑病发病机制极为相似，能有效模拟人类银屑病，并可进一步被用于阐明银屑病发病机制、评估新疗法的疗效。消银方是长海医院治疗银屑病的经典组方，能有效改善、控制银屑病病情，并且价格低廉，副作用相对较小。依巴斯汀是一种无镇静作用的H1受体拮抗剂，有研究表明依巴斯汀可以抑制T细胞增殖和分泌IL-4, IL-5, IL-6以及TNF-α等细胞因子。本课题研究研究目标是在成功构建咪喹莫特诱导的小鼠模型基础上，进一步观察消银方和依巴斯汀作用后，小鼠模型皮损的组织学改善情况和皮损中Th1、Th17细胞下游细胞因子的变化，来探讨消银方的作用机制及依巴斯汀治疗银屑病的可能性。第一部分咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型的建立及评价[研究目的]构建咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型，为进一步药物作用机制研究奠定基础。[研究方法]选用BABL/c小鼠是模型动物，取背部2cm×1.5cm区域脱毛，空白对照组背部无毛区每日涂抹蒸馏水约0.5ml，模型组背部无毛区涂以5%咪喹莫特乳膏，60mg/天，连续6天。观察小鼠涂药区皮肤变化情况。造模结束后，肉眼观察小鼠背部皮肤有无红斑、鳞屑及严重程度；两组小鼠脱臼处死，取背部皮损制作石蜡切片行HE染色，观察表皮厚度及炎症细胞浸润情况。[结果]肉眼观察空白对照组皮肤无明显红斑鳞屑，模型组经背部皮肤逐渐出现红斑，并长出黏着性银白色鳞屑。HE染色镜下观察模型组较空白对照组表皮明显增厚，炎细胞浸润数明显增多。[结论]通过5%咪喹莫特诱导构建的银屑病小鼠模型在临床上可较好的模拟银屑病。第二部分消银方、依巴斯汀等药物治疗咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型的疗效评价[研究目的]研究消银方和依巴斯汀治疗咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型的疗效，并进一步验证小鼠模型模拟银屑病的有效性。[研究方法] BABLc小鼠54只，随机分为9组（I—IX组），每组6只。背部脱毛，I组为空白对照组， II-IX组背部无毛区每日涂以5%咪喹莫特乳膏连续6天建模，建模成功后，8个模型组每两天仍需涂抹咪喹莫特乳膏一次，以保持银屑病模型的稳定性。给药方案：II组为模型对照组，不给药；III-IX组依次给予生理盐水（0.5ml/d）、消银方（2.88g/kg.d）、依巴斯汀（3.03mg/kg.d）、复方甘草酸苷（22.75mg/kg.d）、雷公藤多甙（9.1mg/kg.d）、地塞米松（1.02mg/kg.d）、环孢素A（27.30mg/kg.d）药液每日灌胃治疗，疗程2周。治疗结束后处死小鼠，取背部皮损组织，平均分为三份，其中两份立即置于﹣80℃冰箱保存备用，一份投入预先配好的固定液10%福尔马林液中固定。治疗过程中拍照记录皮损处红斑鳞屑变化情况。制作皮损石蜡切片行HE染色，计数各组炎症细胞浸润数和纵向表皮面积值，并进行统计学比较。[结果]通过肉眼观察，治疗2周后， IV组、VI组、VIII组红斑鳞屑较前有所好转，其中VIII组鳞屑厚度较前明显变少变薄；II组、III组、V组、VII组、IX组红斑鳞屑较治疗前无明显改善。浸润细胞数的多重比较显示，空白对照组低于其他各组（P均小于0.05）；模型对照组与生理盐水组均高于其他各组（P均小于0.05）；消银方组低于依巴斯汀组与复方甘草酸苷组（P均小于0.05），与环孢素A组、雷公藤组、地塞米松组无明显差异；依巴斯汀组高于消银方组（P＜0.05），与复方甘草酸苷组、环孢素A组、雷公藤组、地塞米松组无明显差异。纵向表皮面积值的多重比较显示，空白对照组低于其他各组（P均小于0.05）；模型对照组与生理盐水组均高于其他各组（P均小于0.05）；消银方组低于复方甘草酸苷组、环孢素A组、依巴斯汀组（P均小于0.05），与地塞米松组、雷公藤组无明显差异；依巴斯汀组与其他各组均有差异，除低于模型对照组与生理盐水组外，均高于其他组（P＜0.05）。[结论]咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型能有效模拟人类银屑病，并可用于药效学研究。消银方和依巴斯汀治疗银屑病小鼠模型有不同程度的疗效，可有效降低小鼠模型皮损中炎症细胞浸润数量，抑制表皮细胞过度增殖。第三部分消银方、依巴斯汀等药物治疗咪喹莫特诱导银屑病小鼠模型的作用机制研究[研究目的]比较消银方和依巴斯汀治疗后，银屑病小鼠模型皮损中TNF-α、IFN-γ、IL17、IL22等细胞因子在基因及蛋白水平上的差异，从而探索其作用机制。[研究方法]取第二部分中冻存于-80℃冰箱的小鼠皮损组织，分别提取RNA和总蛋白，应用实时定量PCR、Western blot分别检测TNF-α、IFN-γ、IL17、IL22等细胞因子mRNA和蛋白表达。[结果]空白对照组TNF-α、IFN-γ、IL17、IL22mRNA和蛋白表达均显著低于模型对照组与生理盐水组；消银方治疗后小鼠皮损内四种细胞因子mRNA表达较模型对照组均明显下降，其中IL-17mRNA表达下降最明显；依巴斯汀治疗后较模型对照组TNF-α、IFN-γ、IL-17mRNA表达明显下降，但IL-22mRNA无明显变化。TNF-α、IFN-γ、IL17、IL22蛋白表达符合mRNA表达差异。[结论]消银方与依巴斯汀治疗能有效降低银屑病小鼠模型皮损中细胞因子mRNA及蛋白表达，其中消银方作用较为全面，对Th1细胞因子TNF-α、IFN-γ以及Th17细胞因子IL17、IL22均有显著降低作用；依巴斯汀亦对Th1、Th17细胞通路均有抑制作用，但主要作用于Th1细胞通路，能显著抑制TNF-α、IFN-γ的分泌。