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背景和目的:熊果酸(Ursolic acid,UA),为三萜酸类化合物,存在于自然界多种植物中,具有广泛的生物学活性。现代科学研究发现,熊果酸具有护肝、抗菌抗炎、降血脂抗动脉粥样硬化、免疫调节、促进造血系统功能恢复以及抗肿瘤等多种功能。近年来,熊果酸的抗肿瘤作用越来越受到重视,研究发现熊果酸对多种肿瘤细胞系具有生长抑制、细胞毒性和诱导凋亡作用,但其具体的机制尚不十分清楚。本实验主要探讨熊果酸在体外对人胃癌细胞BGC-823的增殖抑制和诱导凋亡机制。 方法:人胃癌细胞株BGC-823用RPMI-1640进行培养。采用MTT法检测熊果酸对BGC-823细胞的增殖抑制效应;用琼脂糖凝胶电泳观察DNA凋亡片段;流式细胞术检测熊果酸作用后BGC-823细胞周期的改变和药物作用后细胞的凋亡率,以及BGC-823细胞表面Fas表达的改变;Western blot印迹法检测BGC-823细胞Bcl-2的表达及caspase-3和caspase-8活性的改变。 结果: 1.MTT结果表明熊果酸对BGC-823细胞具有增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性。熊果酸作用24h时IC50值为43.10μmol/L。 2.凝胶成像系统下观察显示0、20、30、40μmol/L的熊果酸作用24h后无明显DNA梯状带形成,而50μmol/L、60μmol/L的熊果酸作用24h后,电泳带表现为特征性梯状带(DNA ladder)。 3.细胞周期检测发现,随着熊果酸浓度的增加,BGC-823细胞亚G1峰逐渐增高,G1期下降,S期阻滞增加,G2/M期无明显变化;在这些药物浓度下,BGC-823细胞凋亡的百分率逐渐增加。 4.流式细胞仪检测发现BGC-823细胞表面低表达Fas(0.92%),熊果酸作用24h后BGC-823细胞表面Fas的表达无明显改变。 5.Western blot印迹法检测结果表明熊果酸作用24h后随着药物浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低;Caspase-8酶原的表达下降,其43kD、41kD的中间产物和18kD活性片段表达增加;Caspase-3随着熊果酸浓度的增加,酶原的表达下降,17kD和19kD活性片段的表达增加。