携带Livin基因的骨髓间充质干细胞移植治疗对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

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目的:研究携带Livin基因的重组腺病毒感染后骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死大鼠心功能的影响以及livin和促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7、caspase-9在感染前后细胞中的表达水平的变化。方法:(1)通过全骨髓培养法分离培养骨髓间充质干细胞,用流式细胞仪鉴定其表面分子标记物CD29、34、45和90的表达。转染携带Livin基因的重组腺病毒后用流式检测其对MSCs凋亡的影响。(2)通过Western blot印迹法分别检测Livin、capase3、caspase-7、caspase-9的蛋白表达情况(3)采用冠状动脉左前降支结扎法建立心肌梗死模型,然后实验分四组进行:A组:注射无胎牛血清的DMEM组(100uL);B组注射MSCs组(100uL,约l×106个细胞);C组:注射rAd-control/MSCs组(100uL,约l×106个细胞);D组:注射rAd-livin/MSCs组(100ul,约1×106个细胞),各组细胞注射之前都需进行DAPI染色。(4)采用生理仪记录各组大鼠左室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室最内压最大下降速率(-dp/dtmax)来评价大鼠心功能,记录后取出大鼠心脏行冰冻切片,荧光显微镜下观察的DAPI染色细胞的数量。结果:(1) rAd-livin感染MSCs后其凋亡率与正常组和空载组相比都显著降低(P <0.05),促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7或caspase-9在细胞中的表达水平下降(P <0.05);(2)急性心肌梗死大鼠随机分四组注射无血清的DMEM、MSCs、rAd-control/MSCs、 rAd-livin/MSCs后, MSCs、 rAd-control/MSCs、rAd-livin/MSCs组心功能较DMEM组有显著改善(P<0.05),而MSCs、rAd-control/MSCs、rAd-livin/MSCs三组之间无显著差异(P>0.05),但rAd-livin/MSCs组心功能改善更明显,且移植后存活的干细胞数量显著多于其它两组(P<0.05)。结论:(1) rAd-livin感染MSCs后降低MSCs凋亡率,并且降低促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7或caspase-9在细胞中的表达水平;(2)rAd-livin/MSCs移植可进一步改善心肌梗死大鼠心功能
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