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新城疫(Newcastle disease，ND)为禽类（包括家禽和野禽）的一种急性、高度接触性传染病，呈世界性分布，对养禽业是一巨大威胁。1985年以来，基因Ⅶd亚型NDV为我国主要流行强毒株，对NDV基因序列分析发现基因Ⅶd亚型NDVHN蛋白线性表位（346-353位氨基酸）或其附近容易发生氨基酸变异，尤其是E347K氨基酸变异会增大NDV毒株与疫苗株的抗原性差异。本实验室研究发现基因Ⅱ型NDV也有类似氨基酸变异，但这种变异是否影响基因Ⅱ型NDV的抗原性尚不清楚。 go/CH/LHLJ/2/06分离株由本实验室于2006年从非免疫健康鹅群中分离获得。遗传进化分析表明该分离株属于基因Ⅱ型，并且其HN蛋白347位为赖氨酸(K)，而基因Ⅱ型NDVHN蛋白347位多为谷氨酸(E)。本研究将go/CH/LHLJ/2/06全长cDNA克隆至转录载体pOLTV5，构建全长cDNA质粒并命名为pNDVgo，采用反向遗传技术拯救病毒并命名为vNDVgo，建立了go/CH/LHLJ/2/06株反向遗传操作系统。为获得HN蛋白347位氨基酸突变毒株，分别对质粒pNDVgo和La Sota全长cDNA质粒(pNDFLsp)中HN基因进行A1039G和G1039A突变并构建全长cDNA质粒，拯救病毒并分别命名为go/CH/LHLJ/2/06347E和La Sota347K。用HN mAb与4株病毒(La Sota、go/CH/LHLJ/2/06、La Sota347K和go/CH/LHLJ/2/06347E)分别做血凝抑制试验和中和试验，发现HN蛋白347位氨基酸为E的病毒(La Sota和go/CH/LHLJ/2/06347E)能被HN mAb识别而HN蛋白347位为K的病毒（La Sota347K和go/CH/LHLJ/2/06）不能被识别，且差异显著(p＜0.05)，说明成功获得了基因Ⅱ型NDV HN蛋白347位氨基酸突变的病毒株La Sota347K和go/CH/LHLJ/2/06347E。对拯救的病毒vNDVgo、go/CH/LHLJ/2/06347E和La Sota347K进行生物学特性分析，拯救的病毒均保持了亲本病毒低致病力和在鸡胚中高滴度的生长特性，在鸡胚中的生长动力学特性与亲本病毒相似。 为探究基因Ⅱ型NDV HN蛋白347位氨基酸对NDV HN蛋白生物学功能的影响，分别进行了如下实验:(1)用4株病毒（La Sota、go/CH/LHLJ/2/06、La Sota347K和go/CH/LHLJ/2/06347E）以107 EID50的量包被ELISA板，将病毒分别与HN抗血清和相应的NDV全病毒血清孵育进行ELISA试验，发现HN蛋白347位氨基酸为E和K的病毒与HN抗血清和相应的NDV全病毒血清的结合能力均无显著差异(p＞0.05)，即HN蛋白347位氨基酸不影响基因Ⅱ型NDV与多抗血清的结合能力;(2)以108 EID50病毒量的病毒进行HA试验，结果表明HN蛋白347位为不同氨基酸残基的基因Ⅱ型NDV之间的血凝滴度没有显著差异(p＞0.05);将4株病毒感染DF-1细胞1h，通过qRT-PCR检测与细胞吸附的病毒量，结果表明HN蛋白347位氨基酸为E和K的病毒吸附宿主细胞的能力无显著差异(p＞0.05)，即HN蛋白347位氨基酸残基不影响基因Ⅱ型NDV的吸附功能;(3)将4株病毒感染DF-1细胞，用流式细胞仪检测10000个细胞表面的荧光强度，发现347位氨基酸为E和K的病毒的HN蛋白在DF-1细胞表面表达水平无显著差异(p＞0.05)，表明HN蛋白347位氨基酸残基的改变不影响HN蛋白在宿主细胞的合成和运输。最后，通过cross-HI和cross-VN实验研究HN蛋白347位氨基酸对基因Ⅱ型NDV抗原性的影响，结果表明4株病毒之间的抗原相关系数R均介于0.67到1.5之间，即4株病毒之间无显著的抗原性差异，表明HN蛋白347位氨基酸残基不影响基因Ⅱ型NDV的抗原性。本研究表明，HN蛋白347位氨基酸残基不影响基因Ⅱ型NDV的复制、毒力和受体结合活性。此外，与基因Ⅶ型NDV不同，HN蛋白347位氨基酸的差异不影响基因Ⅱ型NDV病毒株的抗原性。