目前缺血性脑血管病尚缺乏理想治疗方法。尽管溶栓治疗获得了很大进展，但仍有半数以上以上的患者在应用溶栓治疗后神经功能恢复不理想，且3-6小时的时间窗严格限制了其应用范围。大量研究证实决定缺血区域神经元命运的不仅仅是缺血，更重要的是取决于缺血后的一系列生化反应。脑缺血后神经元的死亡不但有坏死的过程，而且有凋亡的过程。在脑缺血急性期，神经元坏死与凋亡并存，细胞坏死位于缺血中心区，细胞凋亡主要出现在缺血半暗带；而在脑缺血的迟发性神经元死亡期，则以细胞凋亡为主。凋亡可能决定了最终梗死体积。细胞凋亡是在生理和病理条件下的一种主动死亡方式，是受细胞内基因和一些细胞外因子调控的生物学过程。caspase 家族作为特异性的死亡信号转导分子，被认为是凋亡的执行者。其中caspase-3是caspase级联反应中最关键的效应蛋白酶，被称为“杀手蛋白”。缺血后的级联反应决定了神经元的命运。主要涉及氧自由基的产生、兴奋性氨基酸的毒性作用、细胞内钙超载、能量代谢障碍及炎性介质的释放等机制。神经保护剂就是通过抑制上述异常的病理生理过程来达到保护细胞的目的。针对上述各缺血损伤环节的神经保护剂种类繁多，诸如自由基清除剂、兴奋性氨基酸抑制剂、钙拮抗剂、能量<WP=5>代谢支持剂、各种神经生长因子等。众多学者利用多种离体和在体缺血动物模型，应用各种单一神经保护剂均能够不同程度的减轻脑损伤。但令人困惑的是几乎所有的单一神经保护剂在动物模型有效而临床无效或效果很差，有的因严重副作用而限制了应用。这严重限制了神经保护剂的临床应用和治疗效果。 缺血性脑损伤是一系列复杂的多因素过程，相互影响，互为因果，但又遵循一定规律。针对任何单一环节的神经保护治疗不可能完全、有效地阻断缺血性脑损伤的级联反应。因此神经保护剂的联合应用正逐步被认识和重视，主要是源于以下优点。首先作用于脑缺血损伤级联反应不同环节的神经保护剂联合应用能更有效地阻断级联反应，达到比任何单一神经保护剂更好的脑保护作用，这一点对于在目前任何单一神经保护剂均无确切临床效果的情况下尤为重要。其次，联合用药可以减少单一药物的有效剂量，降低与药物剂量相关的毒副作用。本课题选择能量制剂1，6-二磷酸果糖（FDP）、N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体拮抗剂MK-801和自由基清除剂－N-乙酰半胱氨酸（NAC）联合应用，采用大鼠局灶性脑缺血模型，利用神经病理学、免疫组织化学、原位末端标记、Western印记等多种技术方法观察联合应用不同类型神经保护剂对大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）后梗死体积、神经元凋亡及凋亡蛋白caspase-3表达的影响。探讨其能否达到协同作用，有效地抑制级联反应，从而达到较单一保护剂更好的脑保护作用及其相关作用机制。为临床神经保护剂的应用开辟新途径。现将各部分研<WP=6>究内容概述如下。一．联合应用神经保护剂对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积的影响研究目的 探讨神经保护剂联合应用对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积的影响，旨在研究其对缺血性脑损伤是否有更好的保护作用。方法 月龄4～5个月的Wistar雄性大鼠。随机将大鼠分为对照组、FDP组、MK-801组、NAC组和联合组5组。各组又随机分为缺血6小时和24小时两小组，每小组动物为5只。用10%水合氯醛0.4ml/100g腹腔内麻醉，参照Longa等的线栓法统一栓塞大鼠右侧大脑中动脉，制备大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。采用Zea Longa评分法，评分为0分和4分者均被剔除，随机补充，保证每组5只不变。各治疗组均于MCAO后0.5小时用药。FDP组： FDP (北京华靳制药)50mg/kg腹腔内注射；MK-801组：MK-801(美国sigma公司)1mg/kg腹腔内注射；NAC组：NAC(美国sigma公司)150mg/kg腹腔内注射；联合组：同时腹腔内注射FDP、MK-801、NAC，剂量不变;对照组腹腔内注射生理盐水1.5ml。将大鼠分别于缺血后6小时和24小时断头取脑，做2mm厚的冠状切片，用TTC染色观察联合疗法对缺血后6小时、24小时梗死体积的影响。结果 缺血后6小时对照组梗死体积为144.65±7.37mm3，各治疗组与对照组相比均有显著性差异（P<0.05），联合组(60.22±12.53 mm3)与FDP组(104.19±17.48 mm3)、MK-801组(94.29±8.94 mm3)和NAC组(99.39±14.16 mm3)相比亦有显著性差异(P<0.05)，而FDP组、MK-801组和NAC组之间无显著性差异<WP=7>(P>0.05)。缺血后24小时梗死体积增大。对照组梗死体积为179.23±22.58mm3，各治疗组与对照组相比均有显著性差异（P<0.05），联合组（81.32±13.66 mm3）与FDP（119.74±7.85 mm3 ）组、MK-801（111.14±6.56 mm3）组和NAC（120.81±13.59 mm3 ）组相比亦有显著性差异(P<0.05)，而FDP组、MK-801组和NAC组之间无显著性差异(P>0.05)。结论 联合应用不同类型的神经保护剂—能量制剂1，6-二磷酸果糖（FDP）、N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体拮抗剂MK-801和自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸（NAC），能明显缩小大鼠局灶性脑缺血后不同时间点（6h、24h）的梗死体积，与各单一用药组有显著性差异（P<0.05），证实联合应用不同类型神经保护剂对脑缺血有明显保护作用。二．联合应用神经保护剂对大鼠局灶性