论文部分内容阅读
目的:脑缺血再灌注(cerebral ischemic reperfusion,CIR)损伤时最明显的组织学变化是脑水肿及脑细胞坏死,脑水肿引发的神经功能缺失、颅内压增高、脑疝等后遗症是致残、致命的重要因素,而目前尚无有效的治疗手段。近年来的研究表明,水分子的转运需要通过水通道结合膜蛋白(AQPS)来调节。AQP4在脑组织中分布最广,它主要分布在星形胶质细胞膜表面,与脑缺血再灌注后脑水肿密切相关,因此调控脑内AQP4的表达有望成为脑水肿治疗的一条新线索。蛋白磷酸化可以影响AQP4的水通透性,PKC是AQP4表达和磷酸化的调节者。激活的蛋白激酶C对AQP4进行磷酸化反应,AQP4经磷酸化后其生物活性丧失。丙泊酚为临床广泛应用的静脉麻醉药,大量研究表明其具有神经保护作用,大剂量丙泊酚有减轻脑水肿的明显作用。丙泊酚可以作用于脑内PKC,但是,丙泊酚改善脑水肿的效应,是否与影响脑内AQP4表达和活性有关,并且其调节机制如何,目前研究还不充分。因此本研究在体外星形胶质细胞脑缺血/再灌注损伤模型上,先采用丙泊酚预处理以检测星形胶质缺血/再灌注损伤造成的细胞活力及AQP4表达的情况,明确丙泊酚预处理的神经保护作用及对细胞水肿的影响,为丙泊酚的临床脑保护作用提供理论基础。接着采用PKC阻断剂阻断PKC信号途径,观察细胞水肿及AQP4表达的情况,以明确丙泊酚对细胞水肿及AQP4的影响表达是否通过PKC途径。方法:取出生未超过48小时的Sprague-Dawley大鼠大脑星形胶质细胞做原代培养,传三代后培养于不含血清,糖和丙酮酸的DMEM,放入缺氧培养箱培养Oh,1h,2h,4h,6h,8h,12h,进行缺糖缺氧处理,实验分为对照组,缺糖缺氧[OGD]组,缺糖缺氧复氧组(复氧组缺糖缺氧6h后复氧24h)及加不同浓度(1μM,5μM,10Mm)丙泊酚组。MTF、LDH等检测细胞活性,细胞western-blot检测蛋白水平的表达。之后,采用1μM/L的TPA预处理细胞24小时以抑制PKC,观察丙泊酚对AQP4表达的影响。结果:大鼠星形胶质细胞活性在OGD4小时后明显下降,6小时后下降达约60%,复氧24小时后细胞活性进一部下降至约50%,用丙泊酚预处理后细胞活性改善。AQP4蛋白质在OGD后表达进行性下降,而复氧后表达上升,丙泊酚预处理AQP4蛋白质表达下降。TPA预处理24小时抑制PKC途径后,使丙泊酚对星形胶质细胞蛋白质表达下降的效应得到了显著逆转(p＜0.05)。结论:1.丙泊酚预处理对星形胶质细胞细胞缺氧/再灌注性损伤具有保护作用2.丙泊酚对星形胶质细胞缺血/再灌注性损伤的保护作用可能与下调细胞上AQP4的表达有关。3.丙泊酚可能通过PKC途径来影响AQP4的表达。