论文部分内容阅读
背景与目的：多种病原体(包括细菌、病毒、寄生虫)感染可诱导附睾炎,干扰附睾功能,是损害男性生育能力的重要病因。其中尿路致病性大肠杆菌(Uropathogenic E. coli, UPEC)、腮腺炎病毒(Mumps Virus, MuV)、疱疹病毒(Herpes simplex virus 2, HSV-2)是诱导附睾炎的主要病原体,然而这些病原体诱导附睾炎的机制尚不清楚,本论文以小鼠为模型,旨在研究主要病原体诱导的附睾天然免疫反应的机制。材料与方法：利用TLR2-/-、TLR4-/-、TLR5-/-小鼠模型,结合RNA干扰技术研究相关基因的功能。体外分离与培养原代附睾上皮细胞(epididymal epithelial cells, EECs),用UPEC、MuV与HSV-2感染细胞。利用Real-time RT-PCR实时定量分析基因的mRNA表达水平,Western blot检测基因产物的蛋白水平,免疫组化染色定位蛋白的细胞分布,ELISA检测细胞因子的分泌。附睾原位注射病原体模拟体内感染,分析附睾抵御病原体的天然免疫反应。结果：EEC表达多个模式识别受体,其中TLR4、TLR5可以被UPEC激活并介导EEC的天然免疫反应。TLR2和RIG-I可以被MuV激活,DNA感受器DAI、 p204、cGAS可以被HSV-2诱导上调表达并激活,介导EEC的天然抗病毒反应。UPEC和MuV都可以显著诱导促炎性细胞因子、趋化因子和Ⅰ型干扰素(IFN-α与IFN-p)的表达上调,而HSV-2仅有效上调IFN-α与IFN-β 的表达。在TLR4-/-、TLR5-/-EEC中,附睾抵御UPEC的天然免疫反应都明显低于野生(WT)细胞,说明TLR4与TLR5协同介导UPEC诱导的反应。将TLR2敲除或siRNA沉默RIG-I后,EEC抗MuV病毒的反应也都明显降低,说明TLR2及RIG-I协同介导MuV诱导的天然抗病毒反应。利用siRNA敲低DNA感受器p204、DAI、cGAS时,细胞抗HSV-2病毒能力明显减弱,说明DNA感受器协同介导HSV-2诱导EEC的天然病毒反应。结论：本论文揭示了UPEC,MuV与HSV-2诱导EEC天然免疫反应的模式识别受体及其信号通路,说明附睾组织特异细胞可以调节炎症反应,具有抵抗病原体的天然防御能力。