论文部分内容阅读
目的：CD95(Fas/Apo-1)和其配体CD95L或者活化性抗体相互作用后除了能够触发细胞的凋亡,还可促进细胞增殖、迁移和细胞因子的产生,同时CD95介导的凋亡在RA滑膜中是存在缺陷的。本文主要研究CD95/CD95L对类风湿关节炎的滑膜成纤维细胞增殖以及炎症反应的影响,初步探讨PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用,为进一步揭示RA发病的分子机制和寻找新的基因治疗靶点提供理论依据和实验基础。方法：免疫组化检测RA和0A滑膜组织石蜡标本中CD95蛋白的表达；TUNEL法检测RA滑膜组织的凋亡情况；培养RASFs和OASFs细胞,于第3代至第7代用于实验；流式细胞仪检测细胞CD95的表达和细胞自发凋亡情况。CD95活化性抗体、CD95siRNA和PI3K抑制剂LY294002分别作用于RASFs后,CCK-8法检测细胞的生长增殖情况；RT-PCR法检测IL-6水平；Western Blot检测Akt总蛋白以及pAkt蛋白表达。结果：1.免疫组化结果发现CD95的表达阳性率在RA滑膜组织中较0A明显增高,RT-PCR结果显示RASFs的CD95mRNA表达水平较OASFs高,流式细胞术结果显示RASFs的CD95表达率也比OASFs较高,经统计学处理,差异有统计学意义(P<0.05)；而TUNEL法和流式细胞术发现细胞凋亡不明显。2.CD95活化性抗体刺激RASFs,发现低剂量的活化性抗体(Ong/ml,50ng/m1,100ng/ml,500ng/ml,750ng/ml)作用后促进细胞的生长增殖和炎性细胞因子IL-6的表达(P<0.05),高剂量的(1000ng/ml)可诱导细胞凋亡(P<0.05)。RASFs转染CD95siRNA后,可抑制CD95活化性抗体对细胞的增殖和炎症反应的促进作用。3.利用Western blot证实了CD95活化性抗体作用于RASFs后可磷酸化Akt,在30分钟时最为显著；给予PI3K通路抑制剂LY492002能有效阻断活化性抗体对细胞增殖和炎症因子分泌的促进作用(P<0.05)。结论：CD95L刺激CD95后可促进RASFs的增殖和炎性因子的表达,其机制可能与PI3K/Akt信号转导通路的激活有关。