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普氏立克次体(Rickettsia prowazekii,R.p)是专性细胞内寄生的革兰氏阴性菌，流行性斑疹伤寒的病原体。普氏立克次体种特异性的120kDa表面蛋白是发挥主要免疫作用的表面抗原，是发展流行性斑疹伤寒的诊断制剂和亚单位疫苗的合适靶蛋白。本研究旨在克隆与表达普氏立克次体的120kDa表面蛋白抗原特异性较好的N端部分和免疫反应性较好的C端部分的基因片段，并对表达的重组蛋白的抗原性进行研究。 采用PCR方法，从普氏立克次体基因组中扩增到120kDa表面蛋白抗原N端基因片段和C端基因片段，将两个基因片段分别与原核表达载体pQE30连接，构建重组质粒pQE30／N和pQE30／C。将重组质粒转化大肠杆菌，并用IPTG诱导转化的大肠杆菌表达目的蛋白。SDS-PAGE鉴定pQE30／N转化菌表达的N端重组蛋白的分子量为26kDa，pQE30／C转化菌表达的C端重组蛋白的分子量为67kDa。 免疫印迹分析证明N端重组蛋白和C端重组蛋白均能与普氏立克次体免疫血清特异反应，N端重组蛋白仅与立氏立克次体免疫血清发生交叉反应，C端重组蛋白则与立克次体属的多种立克次体免疫血清发生交叉反应。用ELISA分析重组蛋白与各种相关免疫血清的交叉反应，发现N端重组蛋白和C端重组蛋白与立克次体属内的立克次体免疫血清有较强的交叉反应，但是与贝氏柯克斯体、恙虫病东方体以及其它相关病原体免疫血清无交叉反应，提示N端重组蛋白和C端重组蛋白具有立克次体属特异性。 用N端重组蛋白免疫血清和C端重组蛋白免疫血清与各种相关病原菌抗原作间接免疫荧光分析，结果显示它们与立氏立克次体发生明显的交叉反应，而与其它立克次体的血清学交叉反应不明显。该结果提示该重组蛋白免疫血清可以用作检测普氏立克次体和立氏立克次体的特异性抗体。 为了证明重组蛋白的免疫原性，用纯化的N端重组蛋白和C端重组蛋白免疫小鼠和家兔。采用间接免疫荧光和酶联免疫吸附实验检测免疫小鼠和家兔的血清特异性抗体水平，结果发现N端和C端重组蛋白均能有效地诱导小鼠和家兔产生较高水平的特异性IgG，C端重组蛋白刺激小鼠和家兔产生的体液免疫水军事医学科学院硕仁学位论文摘要平比N端重组蛋白的刺激水平高。 两个重组蛋白分别对同源蛋白免疫小鼠和普氏立克次体全细胞抗原免疫小鼠的脾淋巴细胞进行体外刺激，均能诱导较高水平的淋巴细胞增殖。足垫肿胀实验提示C端重组蛋白能够诱导小鼠发生明显的特异性迟发型变态反应。 采用RT-PCR方法，分析普氏立克次体全细胞抗原免疫小鼠的脾脏T淋巴细胞被不同抗原刺激后是否表达细胞因子正N一Y、IL一2、IL一4和IL一10。结果发现用N端重组蛋白刺激的小鼠脾淋巴细胞表达了IFN一丫和IL一2两种细胞因子，用C端重组蛋白刺激的小鼠脾淋巴细胞表达了正N一Y、IL一2和IL一4三种细胞因子。提示两个重组蛋白能够有效地促进TH。细胞向TH，细胞方向分化，有助于清除细胞内的立克次体感染。 普氏立克次体120kDa表面抗原的N端重组蛋白和C段重组蛋白具有良好的抗原性，能够有效地诱导机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。关于它们能否用作立克次体感染的血清学诊断抗原和抗立克次体感染的亚单位疫苗值得进一步研究。