论文部分内容阅读
目的:通过体内、外实验探讨骨髓间充质干细胞(bone mesenchymalstromal ceils,BMSCs)对治疗实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis,EAMG)的效果及相关机制。
方法:1、用含有大鼠来源的AChRαt97-116多肽片段、结核菌素、弗式不完全佐剂的混合乳剂,免疫健康Lewis大鼠的尾根部,建立EAMG实验动物模型。根据Lennon评分法及体重监测,对模型的建立情况予以评定,并设置CFA对照组、EAMG模型组、BMSCs移植治疗组。2、全骨髓贴壁法提取、扩增健康Lewis大鼠股骨、胫骨内的BMSCs,并以EAMG实验动物模型为研究对象,在二次免疫的同时,以同种异体BMSCs107/只尾静脉移植,依据Lennon评分法及体重监测,初步评定BMSCs尾静脉移植治疗EAMG大鼠模型的效果;同时,H3增殖实验法检测三组大鼠T淋巴细胞的增殖能力,流式细胞仪法检测各组大鼠T淋巴细胞中Th17及Treg细胞亚群的分布情况,进一步证实BMSCs尾静脉移植对EAMG模型大鼠的治疗效果。3、免疫磁珠法提取、分离AChR特异性T淋巴细胞,并分别以T:BMSCs=10:1的比例进行体外共培养,抗转移生长因子-beta(transforming growth factor-β,TGF-β)抗体封闭BMSCs分泌的TGF-β,采用H3增殖试验法检测不同处理组T细胞的增殖能力,ELISA法检测不同处理组T细胞培养上清中IL-6、IL-17等细胞因子的表达,从机制上探讨BMSCs对EAMG的治疗效果及可行性。
结果:体内实验:1、与CFA对照组相比,EAMG模型组大鼠Th17细胞的比例升高(PTh17＜0．001),Treg细胞的比例降低(Ptreg＜0．01),而BMSCs移植则降低了Th17这种炎性细胞的比例(PTh17＜0．05),而提高了保护性细胞亚群Treg的比例(Ptreg＜0．05);2、BMSCs移植组大鼠T细胞对AChR多肽片段的增殖活性降低P＜0．01)。
体外实验:1、ELISA结果显示,单纯培养的AChR．特异性T淋巴细胞IL-17、IL-6等致病性因子的表达高于BMSCs共培养组(PIL-17＜0．05,PIL-6＜0．05),而流式结果显示,单纯培养的AChR．特异性T淋巴细胞Th17亚群的比例明显高于与BMSCs共培养组(PTh17＜0．01),Treg细胞亚群的比例则低于BMSCs共培养组(Ptreg＜0．001),而分别以抗TGF-β抗体拮抗后,能在一定程度上抑制BMSCs的这种免疫调节作用,有统计学意义;2、BMSCs能抑制AChR特异性T增殖的能力(PT＜0．001),而抗TGF-β抗体能不同程度地逆转BMSCs的这种抑制作用,有统计学意义。
结论:1、BMSCs尾静脉移植治疗能有效缓解EAMG的临床症状;2、BMSCs通过逆转EAMG中Th17/Treg两种辅助性T细胞亚群的失衡状态起到免疫治疗效果;3、BMSCs能够抑制．AChR特异性T的增殖活性;4、BMSCs对EAMG的免疫调节功能是部分通过分泌。TGF-β抑制性因子来完成的。