自然发酵北方风干香肠主要微生物分离及纯菌接种发酵工艺研究

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自然发酵北方风干香肠是以生肉为主要原料,经过修整、绞碎、配以辅料后灌入猪小肠内,经发酵干制而成的肉制品,产品风味独特,营养丰富深受人们喜爱。本文从自然发酵北方风干肠香肠中微生物组成入手,在分析了微生物的组成后进一步对主要微生物进行了分离、筛选,并将筛选出的微生物用于发酵风干肠产品验证,为肉制品发酵剂的开发提供了前期的理论基础。采用了微生物菌落计数、PCR-DGGE两种方法对三种自然发酵北方风干肠的微生物组成进行了分析,结果表明乳酸菌、葡萄球菌和芽孢杆菌是风干肠中的优势微生物。菌落计数结果表明在风干肠发酵的第5天左右,微生物的生长量达到峰值,乳酸菌与芽孢杆菌最大数量大于10~7cfu/g,葡萄球菌与微球菌最大数量大于10~6cfu/g。用MRS、MSA、MYP三种培养基对三种自然发酵北方风干肠中的乳酸菌、葡萄球菌与微球菌、芽孢杆菌进行了分离,得到12株符合乳酸菌特征的菌株、11株符合葡萄球菌与微球菌特征的微生物、12株符合芽孢杆菌特征的菌株。通过菌株亚硝酸盐耐受性、食盐耐受性、低温耐受性、耐酸性等耐受性试验与蛋白水解能力、脂肪水解能力、产酸能力、亚硝酸盐还原能力等发酵性能试验对分离得到的35株菌进行了筛选。结果表明,33株菌能够耐受150mg/kg的亚硝酸盐、30株菌能够耐受6%的食盐、34能够耐受15℃的低温、35株均能在pH=5.0的环境中生长、12株菌具备蛋白水解能力、9株菌具备脂肪水解能力;12株乳酸菌中的LA2、LC3的发酵液24h内pH可由7.0分别降至4.39与3.94,产酸能力显著高于其他菌株;11株葡萄球菌与微球菌种SC3硝酸盐还原酶活力最强,为4.1U/ml。综合上述实验结果及微生物多样性的考虑,根据上述菌株特征,进一步选取9株菌LA2、LB2、LC3、SA1、SA2、SC3、BA1、BA3、BC3用于后续组合发酵验证实验。对筛选得到的9株菌进行了最适生长温度、最适生长初始pH、生长曲线等生物学特性的研究,蛋白酶、脂肪酶活力曲线的测定以及种属的鉴定。结果表明这些菌株的最适生长温度均处于30~37℃;乳酸菌、微球菌与葡萄球菌的最适生长初始pH处于7~7.5,芽孢杆菌的最适宜生长初始pH为6,在接种量为3%的条件下,这9株菌分别在2~4h进入对数生长期,10~~15h进入稳定期;9株菌产蛋白酶与脂肪酶的时间与产量差异性较大;SA2在60h蛋白酶活力可达85U/ml显著高于其他菌株,SA2、BA1最大脂肪酶活力分别为2.69U/L(60h)、2.89U/L(36h)显著高于其他菌株。16SrDNA鉴定结果表明LA2、LB2、LC3、SA1、SA2、SC3、BA1、BA3、BC3分别为Weissella thailandensis, Lactobacillus sakei, Lactobacillus sp.Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus xylosus, Kocuria rosea, Bacilluspumilus, Bacillus safensis, Viridibacillus arvi。用优良菌株进行了单菌株与复配菌株风干肠发酵实验。风干肠的制作以正阳楼风干肠的配料为参照。拮抗实验表明乳酸菌对芽孢杆菌、微球菌与葡萄球菌存在酸抑制,部分芽孢杆菌与微球菌、葡萄球菌间存在微弱的拮抗关系。优良菌株单菌接种发酵实验表明,接种SA1、SA2、SC3组的红度值显著高于对照组,接种SA2、SC3组的硬度显著高于对照组。不同功能菌株组合发酵实验结果显示,所有复配组合均能较对照组快速降低pH,TPA分析结果表明各组各的硬度均高于对照组,组1(LA2+SA2+SC3)与组6(LC3+SA2+SC3+BA1)的硬度显著高于其他组合,色差分析结果表明组1与组2(LC3+SA2+SC3)的红度值较高。感官品评结果表明组1与组6的接受度较高,可以初步认定为优良组合。对优良组合接种量进行了优化实验,优化结果表明当组1的接种量为1%时,产品接受度较高。组6接种量为10~%时,产品接受度较高。本研究在分析了自然发酵北方风干肠微生物组成的基础上,对优势微生物进行了分离,经菌株的风干肠环境耐受性试验与发酵性能试验筛选得到了9株优良菌。在近一步对9株菌进行了生物学特性及发酵特性研究的基础上,进行了纯菌接种发酵风干肠产品验证,通过单菌发酵实验与复配菌株发酵实验得到了(LA2+SA2+SC3)与(LC3+SA2SC3+BA1)两组优良的组合,为肉制品发酵剂的开发奠定了理论和实践基础。
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