【摘 要】
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藻胆体(phycobilisome)是存在于蓝藻和红藻中的一类捕光蛋白复合物,它由藻胆蛋白(phycobiliprotein)和连接蛋白组成。藻胆蛋白由藻胆色素(phycobilin)与相应的脱辅基蛋白中保
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藻胆体(phycobilisome)是存在于蓝藻和红藻中的一类捕光蛋白复合物,它由藻胆蛋白(phycobiliprotein)和连接蛋白组成。藻胆蛋白由藻胆色素(phycobilin)与相应的脱辅基蛋白中保守性半胱氨酸的巯基以硫醚键共价结合而成。藻胆蛋白是一类结构相似的色素蛋白。根据它们的吸收光谱,藻胆蛋白可分为藻蓝蛋白(phycocyanin,简称PC)、藻红蛋白(phycoerythrin,简称PE)和别藻蓝蛋白(allophycocyanin,简称APC),在某些没有藻红蛋白而具有异形胞的蓝藻中,还有藻红蓝蛋白(phycoerythrocyanin,简称PEC)。 在体内,藻胆色素的正确连接一般都需要特异的裂合酶来催化完成。藻红蓝蛋白裂合酶PecE/F催化藻蓝胆素PCB异构化形成PVB并与脱辅基蛋白PecA连接。在血红素氧化酶的作用下,血红素Ⅸ被氧化而共轭环断裂形成胆绿素Ⅳ,胆绿素Ⅳ被藻蓝胆素合成酶还原和异构化形成藻蓝胆素PCB。 本课题利用分子的生物学方法得到pETDuet-pecA质粒,然后将pecA、pecE/pecF、hol(血红素氧化酶基因)、pcyA(藻蓝胆素合成酶基因)共同转化大肠杆菌,使其共表达,实现PEC的体内重组。通过荧光光谱检测体内重组产物,结果表明生成的色素藻胆蛋白具有藻红蓝蛋白a-亚基所特有的光谱性质和可逆光质变色性质。 本实验还通过大量的随机酶切集胞藻Synechocystis sp.strain PCC6803基因组DNA,将所得的酶切片段转入细菌双杂交系统所提供的靶载体上,通过逐层的筛选构建Synechocystis sp.strain PCC6803基因组DNA文库,并利用细菌双杂交来检测其与已知基因的蛋白质相互作用。
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