研究目的：　　 乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，虽然通过规范化治疗，早期乳腺癌患者五年生存率达到98％，但是，与40年前相比，转移性乳腺癌患者5年生存率只从20％提高至26％，患者多死于转移，故研究乳腺癌的转移机制具有重要意义。Twist是一种常染色体上的bHLH(basic helix-loop-helix)类型的转录因子，研究发现Twist在抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤细胞侵袭、转移过程中起重要作用。本研究利用人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231进行细胞转染调控其Twist1的表达，从而探讨转录调控因子Twist1对人乳腺癌细胞上皮钙粘蛋白(epithelialcadherin，E-cadherin)表达的影响，及对人乳腺癌细胞迁移、侵袭和成血管塑形能力的影响。　　 方法：　　 1.根据Twist1表达水平，选取人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231，37℃、5％CO2恒温培养箱常规培养。　　 2.低表达Twist1的MCF-7细胞转染上调Twist1表达质粒pcDNA3-Twist1获得Twist1上调模型，高表达Twist1的MDA-MB-231细胞转染下调Twist1表达质粒pGP-Twist1-shRNA获得Twist1下调模型，利用Western Blot和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)分别从蛋白水平和mRNA水平鉴定转染效果;　　 3.利用RT-PCR检测MCF-7细胞上调Twist1和MDA-MB-231细胞下调Twist1后E-cadherin在mRNA水平表达的变化;　　 4.利用细胞免疫荧光检测MCF-7细胞上调Twist1和MDA-MB-231细胞下调Twist1后E-cadherin表达及亚细胞定位的变化;　　 5.利用划痕实验观察乳腺癌细胞MCF-7上调Twist1和MDA-MB-231下调Twist1后细胞迁移能力的变化;　　 6.Transwell实验评价乳腺癌细胞MCF-7上调Twist1和MDA-MB-231下调Twist1后细胞侵袭能力的变化;　　 7.进一步利用Matrigel三维培养模型分析Twist1对人乳腺癌细胞管道化塑性能力的影响。　　 结果：　　 1.根据RT-PCR和Western Blot结果显示，在mRNA和蛋白水平，pcDNA3-Twist1均能明显上调MCF-7细胞的Twist1表达，pGP-Twist1-shRNA可以有效下调MDA-MB-231细胞内Twist1表达，并且细胞形态也出现相应变化;　　 2.根据RT-PCR结果显示，上调Twist1后MCF-7细胞E-cadherin表达下降，免疫荧光显示其膜表达消失，亚细胞定位发生改变;下调Twist1后MDA-MB-231细胞E-cadherin表达增多。　　 3.根据划痕实验、Transwell实验结果，对上调Twist1的MCF-7细胞和下调Twist1的MDA-MB-231细胞进行对比分析表明:上调Twist1可以促进人乳腺癌细胞MCF-7的迁移运动和侵袭能力，下调Twist1可以降低人乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移和侵袭能力，P＜0.05，有统计学意义。　　 4.根据三维培养结果，对上调Twist1的MCF-7细胞和下调Twist1的MDA-MB-231细胞进行对比分析表明:三维培养条件下，上调Twist1可以促进MCF-7细胞形成管腔样结构，下调Twist1可抑制MDA-MB-231细胞形成管腔样结构。　　 结论：　　 1.作为EMT关键调控基因，Twist1表达上调能抑制恶性度低的乳腺癌细胞E-cadherin的表达，并增强其迁移、侵袭及血管生成能力，Twist1表达下调能增强恶性度高的乳腺癌细胞E-cadherin的表达，并抑制其迁移、侵袭及血管生成能力。　　 2.Twist1及其调控的E-cadherin是影响乳腺癌细胞高侵袭能力的关键分子。　　 3.Twist1能诱导人乳腺癌细胞产生EMT，并且促进VM形成。　　 4.Twist1和E-cadherin是调控乳腺癌VM形成的重要蛋白，可以作为其诊断标志物，并且Twi st1和E-cadherin也有望成为抑制乳腺癌血管生成的治疗靶点。