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目的:验证miR-520a对P65的调控关系以及探讨在蒙药那如三味丸的作用下,miR-520a/P65如何影响促炎细胞因子(IL-1β和TNF-ɑ)、抗炎细胞因子(IL-10和TGF-β1)的水平,对坐骨神经痛发挥治疗作用的机制,为蒙药在炎症以及坐骨神经痛中的诊治提供一种新思路及选择。方法:首先采用非压迫腰椎间盘突出模型的方法进行大鼠坐骨神经痛模型的制作,并分别测定未给药时四组大鼠术前、术后1天、3天、5天、7天、10天以及14天时,机械刺激下的缩腿反射阈值,对造模的成功与否进行验证。在给药15天后,采用ELISA实验确定给药后大鼠血清中可以作为评判坐骨神经痛炎症反应指标的炎症因子。随后进行基因芯片技术筛选模型组与给药组中表达差异的miRNA,并预测该miRNA的下游靶向。采用实时荧光定量PCR检测蒙药那如三味丸作用下miR-520a、P65以及促炎细胞因子(IL-1β和TNF-ɑ)、抗炎细胞因子(IL-10和TGF-β1)在mRNA水平的表达;Western blot法检测蒙药那如三味丸作用下P65在蛋白水平的表达;ELISA实验检测蒙药那如三味丸作用下促炎细胞因子(IL-1β和TNF-ɑ)、抗炎细胞因子(IL-10和TGF-β1)在蛋白水平的表达;HE染色以及免疫组化分析在蒙药那如三味丸作用下坐骨神经的病理学变化,以及P65在坐骨神经中的表达。最后采用双荧光素酶报告基因实验再次检测miR-520a与P65之间的靶向调控关系。结果:通过测量大鼠的MWT值验证造模已经成功,且ELISA实验显示给药前模型组大鼠血清中促炎因子(IL-1β、TNF-ɑ)的含量显著升高(P<0.01),且抗炎因子(IL-10、TGF-β1)的含量显著下降(P<0.01)。给药后IL-1β、TNF-ɑ的含量显著降低(P<0.01),抗炎因子IL-10、TGF-β1的含量显著升高(P<0.01),提示上述四种炎症因子可以作为坐骨神经痛的评判指标。通过芯片技术筛选出表达差异的miRNA为miR-520a,并通过生物信息学测出miR-520a下游靶向为P65,且实时荧光定量PCR证实,miR-520a在mRNA水平的表达结果与芯片技术筛选的结果一致,并且在mRNA水平上miR-520a的表达与促炎因子呈负相关,与抗炎因子呈正相关,与P65的表达呈负相关。ELISA实验以及Western blot实验证实在蛋白水平,P65的表达与促炎因子呈正相关,与抗炎因子呈负相关。HE染色分析发现假手术组中神经的排列紧密、有序,而模型组中神经损坏程度极大,出现明显的空泡,神经纤维严重变形,而给药后,神经纤维有所修复,空泡明显减少,神经纤维受损程度也有所改善。免疫组化分析发现P65在假手术组中没有表达,在模型组中P65却呈现重度表达,而给药后P65的表达下降。双荧光素酶报告基因实验再次验证,与其他组相比,当miR-520a mimics与P65 3′UTR的重组质粒共转染后,荧光素酶信号显著下降(P<0.01)。当miR-520a mimics处于高或低表达时,再与突变的P65 3′UTR重组质粒共转染后,其荧光素酶信号均无明显下降。结论:在非压迫腰椎间盘突出的大鼠模型中,给予蒙药那如三味丸后,在镇痛方面具有显著的作用。miR-520a可以特异性直接靶向作用于P65,且那如三味丸可以促进miR-520a的表达,进而抑制P65的表达,产生下调促炎因子IL-1β、TNF-α,上调抗炎因子IL-10、TGF-β1的作用,进而治疗坐骨神经痛。