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环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种借助于具有链置换活性的DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)实现恒温扩增的技术,通过反应产生的焦磷酸镁沉淀物或者添加荧光染料后颜色的变化,肉眼即可判定检测结果。LAMP技术操作简单,耗时短,在植物寄生线虫的快速检测中已得到广泛应用。本研究通过LAMP特异性引物的设计、反应条件的优化及特异性及灵敏度的检测,分别建立了水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)、山茶根结线虫(Meloidogyne camelliae)、苹果根结线虫(Mmali)的LAMP快速检测体系,为田间检测和检疫防控提供技术支持。水稻干尖线虫病是一种为害水稻的种传病害,通过比较GenBank登录的水稻干尖线虫ITS rDNA区序列,设计LAMP特异性引物5条,确定的优化反应条件为Mg2+浓度3.0 mmol/L、dNTPs 浓度 0.8 mmol/L、甜菜城浓度 0.2 mol/L、反应时间 60min 时,LAMP扩增效率最高,产物经SYBR Green Ⅰ染色后可直接肉眼观察。建立的LAMP检测体系,能够特异地从11种供试线虫种群中检测出水稻干尖线虫;检测灵敏度为1/20 000单条线虫DNA,比常规PCR灵敏度高10倍。山茶根结线虫和苹果根结线虫都是我国进境植物检疫性有害生物名录中的非中国种,它们随进境苗木传入扩散的风险极高。根据山茶根结线虫28S rDNA非保守区域设计LAMP特异性引物5条,确定的优化反应条件为dNTPs浓度1.0mmol/L,Mg2+浓度5.0 mmol/L,不添.加甜菜減,反应时间60 min时,扩增效果最佳。建立的LAMP检测体系,对山茶根结线虫检测特异性强,检测灵敏度可达1/200 000单条线虫DNA,比普通PCR高100倍以上。根据苹果根结线虫28S rDNA非保守区域设计LAMP特异性引物6条,确定的优化反应条件为dNTPs浓度0.4mmol/L、Mg2+浓度5.0mmol/L、不添加甜菜碱、反应时间60 min时,LAMP扩增效率最高。用琼脂糖凝胶电泳、SYBR Green Ⅰ染色和横向流动试纸均能检测到苹果根结线虫的扩增产物。建立的LAMP快速检测体系,能够特异地从10种供试植物线虫种群中检测出苹果根结线虫;检测灵敏度为1/20 000单条线虫DNA,比常规PCR灵敏度高10倍。总之,本文所建立的三种LAMP检测体系,对水稻干尖线虫的田间病害防控,以及山茶根结线虫和苹果根结线虫的口岸植物检疫具有重要的应用价值。