西瓜枯萎病菌FoCdk7、FoCdk9、FoCdk10和FoNot2基因在致病性中的功能研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhongxuw
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由尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)侵染引起的西瓜枯萎病,是西瓜上的一种重要真菌病害,严重威胁着我国西瓜产业的发展,但有关西瓜枯萎病菌致病性机制的研究相对有限。本文重点研究了西瓜枯萎病菌中细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent Kinases,CDKs)家族中FoCdk7、 FoCdk9和FoCdk10以及CCR4-NOT(Carbon catabolite repressor 4,negative on TATA-less)复合体中FoNot2在致病性中的功能及其可能的作用机制。本文主要依靠基因敲除技术,鉴定到了西瓜枯萎病菌中3个CDKs家族基因FoCdk7、FoCdk9、FoCdk10和1个CCR4-NOT复合体基因FoNo52;成功获得其缺失突变体和回补突变体;通过表型分析、致病性测定、胁迫压力测定和毒素测定等方面研究,系统地分析了这4个基因的生物学功能。主要研究结果如下:(1)通过测定菌落形态、产孢量、分生孢子萌发率和致病性等表型,发现FoCdk7、FoCdk9、FoCdk10和FoNot2基因均调控了西瓜枯萎病菌的气生菌丝生长、色素合成、产孢量和致病性,并显著影响了西瓜枯萎病菌的穿透能力,可能是调控其致病性的首要原因。(2)通过突变体对细胞壁胁迫因子敏感性研究,发现FoCdk7、FoCdk9、 FoCdk10和FoNot2基因均可影响西瓜枯萎病菌细胞壁的完整性,6个几丁质合酶相关基因的表达也受到显著调控,表明FoCdk7、FoCdk9、FoCdk10和FoNot2基因直接或间接参与调控西瓜枯萎病菌的细胞壁完整性途径。(3)FoCdk7、FoCdk9、FoCdk10和FoNot2基因影响了西瓜枯萎病菌对氧化胁迫的反应,这些基因的缺失均减弱了对氧化胁迫因子的抗性,5个过氧化物酶合酶相关基因的表达也显著低于野生型,表明FoCdk7、FoCdk9、FoCdk10和FoNot2基因调控西瓜枯萎病菌的抗氧化胁迫能力。(4)通过HPLC技术分析菌株中FA毒素含量,发现△FoCdk7、△FoCdk9、ΔFoCdk10和ΔFoNot2突变体中的FA毒素合成量显著下降,6个FA合成相关基因的表达水平同时也显著下调,说明了FoCdk7、FoCdk9、FoCdk10和FoNot2基因调控西瓜枯萎病菌的FA毒素合成,可能是影响其致病性的关键因素。本研究结果表明,FoCdk7、FoCdk9、FoCdk10和FoNot2基因在西瓜枯萎病菌生长发育、环境适应性、致病性和毒素合成等生命过程中均发挥了重要作用。
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