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本文以原生质体融合技术选育获得高产L-乳酸菌株TL-3为出发株,经高酸、高糖驯化与筛选获得的数了株菌,并对TL-3-R-16菌株的发酵特性、培养基、发酵条件进行研究。最后在5L发酵罐上进行发酵试验,、进一步提高菌株的产酸性能。根据L-乳酸菌的特性,利用CaCO3平板反复筛选,得到16株利用葡萄糖为碳源的产L-乳酸量较高的菌株,50℃、摇床150rpm振荡培养72h,L-乳酸产量在80g／L以上。经过复筛及发酵试验,确定了一株为出发菌株,记为TL-3-R-16,L-乳酸的产量达到了106g/L,L-乳酸的纯度达到96%以上。测定了此菌株的生长曲线和在驯化培养基中pH的下降趋势。通过单因素试验,研究了不同碳源、氮源种类对L-乳酸产量的影响,最终确定了碳源为玉米糖化液,氮源为小肽和玉米浆,并进一步对其用量进行了实验,得到最适玉米糖化液浓度为葡萄糖含量160g/L,小肽10g/L,玉米浆40mL/L。在单因素试验的基础上,利用响应面分析法优化了培养基中影响L-乳酸产量的主要因素,得到了玉米糖化液、小肽、玉米浆及摇床振荡培养时间最佳组合分别为：160g／L、10g／L、5g／L,其对应的L-乳酸产量为155g/L,对结果进行验证得到L-乳酸的产量为153.8g／L,说明模型与实际情况拟合的很好。通过单因子实验对菌株TL-3-R-16的培养条件进行了优化,确定了最佳发酵方式为摇床150rpm振荡培养24h后静置培养至72h,最佳接种量为10%,最佳种龄为18h,最佳发酵温度为52℃。对TL-3-R-16菌株进行5L罐发酵,结果确定了5L发酵罐上的发酵条件为通风量180L/h,通风时间为20h,L-乳酸产量达到了125g／L,转化率达到了92.6%。发酵周期由摇瓶发酵的72h缩短到48h。