中国浓香型白酒发酵黄水中微生物群落结构及多样性解析

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黄水是浓香型白酒酿造的副产物,是窖池微生态系统的重要组成部分,介导糟醅及窖泥之间物质和能量的交换。黄水不仅含有丰富的糖、蛋白等营养成分,醇、酯、酸、酮、醛等多种呈味物质,还含有大量长期驯化的益生菌群,在中国浓香型白酒发酵中发挥积极作用。因此,本文在已有的糟醅和窖泥微生物区系结构研究的基础上,运用传统培养和构建SSU rRNA文库的方法探索发酵黄水中微生物多样性。采用传统分离培养方法,分别从黄水中分离得到61株真菌和141株细菌。SSU rRNA鉴定结果显示发酵黄水中的可培养真菌主要有Monascus fuliginosus, Penicillium freii,Aspergillus fumigatus, Saccharomyces cerevisiaes, Mucor indicus,其中Saccharomycescerevisiaes是黄水中真菌主要类群,占总数的41.0%。可培养细菌类群均为厚壁菌门(Firmicutes)、细菌(Bacilli)纲、芽孢杆菌目(Bacillales)的产芽孢细菌。依次被分为Staphylococcaceae、Planococcaceae、Paenibacillaceae和Bacillaceae四个科,Macrococcus、Sporosarcina、Planococcaceae incertae sedis、Solibacillus、Paenibacillus、Bacillus、Brevibacillus及Lysinibacillus等8个属。其中Planococcaceae科Lysinibacillus属(21%)和Bacillaceae科Bacillus属(58%)为黄水中可培养细菌菌群的优势菌。微生物群落多样性分析结果显示,细菌和真菌群落的多样性指数Shannon-weaver (H)分别为1.83和0.95、优势度指数4.50和2.16、盖度指数100%和100。通过构建黄水微生物克隆文库显示:所获得的151个细菌克隆子分别归为变形菌门(Proteobacteria)、软璧菌门(Tenericutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、黏胶球菌门(Lentisphaerae)及放线菌门(Actinobacteria)等六个门以及一个未分类类群,其中Firmicutes、Proteobacteria为主要类群,分别占克隆子总数的(47.6%)和(29.1%)。在种属分类水平上, Clostridium (25.8%)、Lactobacillus (15.9%)和Serratia (14.6%)为优势菌群。随机选择的37株古菌克隆子均属于广古菌门(Euryarchaeota)、甲烷微菌纲Methanomicrobia纲,其中以A13为代表Methanosarcina属古细菌(59.5%)及以A8为代表的Methanoculleus属(35.1%)占古菌数量的绝大多数。多样性分结果显示:细菌和古菌克隆文库的多样性指数Shannon-weaver (H)分别为2.75和0.83、优势度指数12.88和2.14、盖度指数99.9%和100%。综上可知,在黄水微生物类群组成中,受环境条件的影响,细菌在数量和种类上相对丰富,而真菌和古菌种类和数量较少。物种鉴定结果显示,黄水中多数微生物为功能性微生物,在营养物质代谢、酸、醇、酯、醛、酮等功能成分合成方面发挥着重要作用,是浓香型白酒香味物质的来源与基础之一。本研究结果对探明中国浓香型白酒呈香呈味物质的形成机理、改进白酒酿造技术、提高白酒产量及质量具有重要的指导意义。
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