大豆胞囊线虫和秀丽隐杆线虫在染料木素中暴露评价

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:phenix519
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染料木素天然存在于豆科植物中,具有多种药理活性,它可以使线虫引起剂量依赖性的弛缓性麻痹,具有驱虫特性。本试验选取了大豆胞囊线虫与秀丽隐杆线虫两种供试线虫,测定了染料木素溶液的暴露下的线虫失活情况、各形态下卵(散卵粒、白色胞囊和褐色胞囊)孵化的抑制效果以及线虫体内营养物质(总糖,可溶性蛋白和甘油)含量的变化情况,用Real-time PCR方法测定了秀丽隐杆线虫L4在染料木素溶液暴露下,糖代谢的主要途径中关键酶的相关基因表达。结果如下:1.染料木素暴露对供试线虫的活性影响。将染料木素配制成1、25、50、100μg/m L的染料木素溶液,测定其对秀丽隐杆线虫L4和大豆胞囊线虫J2的致死率以及大豆胞囊线虫各形态下卵孵化的抑制效果。试验结果表明:不同浓度的染料木素对供试线虫活性和卵的孵化均有一定程度的影响。高浓度的染料木素溶液暴露对J2和L4的毒杀作用相对明显,72 h时,100μg/m L对J2和L4的校正死亡率分别为56.94%和43.72%。此时,染料木素对大豆胞囊线虫的LC50为67.79μg/m L,对秀丽隐杆线虫的LC50为119.1μg/m L。72 h,100μg/m L的染料木素溶液对散卵粒的抑制率达到53.04%,3 d时,对褐色胞囊和白色胞囊中的卵孵化抑制率分别为61.18%和48.17%。2.染料木素暴露对供试线虫物质代谢的影响。选取100μg/m L的染料木素溶液暴露大豆胞囊线虫J2和秀丽隐杆线虫L4,测定两者体内总糖、可溶性蛋白以及甘油含量的变化。结果表明:染料木素的暴露使J2体内的糖类和蛋白质水平都显著下降,甘油水平显著增加,而染料木素暴露后的L4体内的总糖、可溶性蛋白和甘油含量均有所降低。J2和L4在染料木素暴露早期,体内的物质含量变化明显,随着暴露时间越长,对其影响情况变弱。3.染料木素暴露对秀丽隐杆线虫L4糖代谢相关途径关键酶基因的影响。采用荧光定量PCR技术检测经100μg/m L的染料木素溶液暴露后秀丽隐杆线虫L4糖代谢相关途径中关键酶基因的相对表达量。结果显示染料木素暴露秀丽隐杆线虫L4一段时间后,在糖酵解过程中与磷酸果糖激醇和丙酮酸激酶相关的基因pfk-1.1和pyk-1、gad-2在染料木素暴露后相对表达量显著降低(p<0.05),糖异生途径中与磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶相关的基因pck-1相对表达量显著升高(p<0.05);与此同时,胰岛素通路中的相关基因ctl-1的表达量显著降低,而基因daf-2的表达量却显著升高(p<0.05)。
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