小菜蛾（Plutella xylostella）是世界性蔬菜害虫，具有繁殖速度快、世代重叠严重、容易对化学农药产生抗药性等特点，因此开发对小菜蛾具有高致病力的微生物杀虫剂具有非常重要的意义。绿僵菌（Metarhizium）是一种非常重要的昆虫病原真菌，对包括小菜蛾在内的多种农林害虫具有杀虫活性，但在实际的应用中绿僵菌制剂暴露出致死时间长、菌种毒力低、杀虫谱窄等问题。因此寻找、构建新的高毒力工程菌株成为绿僵菌研究的一个重要方向。本论文围绕对小菜蛾高效绿僵菌菌株的筛选、以及工程菌的构建进行了研究，取得了以下主要结果：利用浸叶法测定了实验室保存的12个绿僵菌菌株对小菜蛾的致病力，发现了一株对小菜蛾具有较高致病力的绿僵菌菌株，编号为609。在孢子浓度为1×10⁸个/mL下，处理8天后死亡率达86.7%，在孢子浓度为1×10⁷个/mL浓度下，致死中时为5.7d。经过分子鉴定，将菌株609鉴定为金龟子绿僵菌蝗绿僵菌变种（Metarhizium anisopliae var. acridum）。将来源于苏云金芽孢杆菌、对小菜蛾高效的杀虫晶体蛋白基因cry1Ba插入到表达载体pET-28a中，得到pET-1Ba载体，将其导入大肠杆菌BL21中，利用IPTG诱导表达、提取Cry1Ba蛋白。测定了Cry1Ba蛋白对绿僵菌孢子萌发生长的影响，结果表明Cry1Ba蛋白不影响绿僵菌孢子的萌发生长。构建了以苯菌灵benA3为抗性标记基因、cry1Ba为目的基因的Camben-1Ba双元表达载体。采用农杆菌介导的转化方法将载体Camben-1Ba导入绿僵菌菌株609中，通过PCR检测获得阳性转化株，Southern blot进一步证实了cry1Ba基因已整合到受体绿僵菌基因组上。测定了部分转化子对小菜蛾2龄幼虫的毒力，结果显示，与野生型609菌株相比，不同转化子对小菜蛾的毒力有不同程度的改变，尤其转化子609-1对小菜蛾毒力增加幅度最大，达22%，LT50比野生型缩短了1d。构建了以绿色荧光蛋白基因gfp为报告基因、苯菌灵抗性基因benA3为标记基因的Camben-gfp载体和以gfp为报告基因、benA3为抗性标记基因和cry1Ba为目的基因的Camben-gfp-1Ba载体。采用农杆菌介导的方法将两个载体分别导入绿僵菌菌株609中。通过PCR和荧光显微镜观察的方法证明gfp基因可以在转化菌株中成功表达。测定了含有Camben-gfp载体的绿僵菌转化株609-gfp在土壤中的存活状态。结果表明，当以孢子浓度为10⁷CFU·g^-1施入土壤后，转化株609-gfp的群体数量一直在减少，5d后减少将近1个数量级，处理29d仍然可以检测到标记菌的群体数量接近104CFU·g^-1。