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目的：喉返神经（Recurrent laryngeal nerve,RLN）损伤是甲状腺手术中最严重的并发症之一。术后的永久性和短暂性喉返神经麻痹的发生率分别为2.3%和9.8%。喉返神经损伤后会出现声音嘶哑、呼吸困难，甚至因窒息而危及生命。目前对它的修复手段很有限，如何修复受损的神经，是临床外科医生面临的难题。本研究设计了一种治疗外周神经损伤的创新思路：将脐带间充质干细胞(HUCMSCs)、神经生长因子(NGF)与经肝素活化的胶原蛋白(Coll-H)复合，制备成HUCMSCs/NGF/Coll-H复合支架，利用组织工程技术用于喉返神经损伤的修复。 方法：1.采用改进的单一酶消化法从人脐带高效分离和提取HUCMSCs，对提取的脐带间充质干细胞，进行培养传代，并应用光学显微镜和流式细胞仪等进行鉴定。2.通过冷冻干燥法制备了负载NGF的Coll复合支架NGF/Coll-H。采用红外光谱(FTIR)分析支架的物质组成和分子结构，扫描电子显微镜(SEM)观察支架表面的大体形貌，热重分析(TG)检测复合支架的热稳定性，CCK-8法测定支架的细胞毒性，用酶标仪检测吸光度的方法测定支架上的神经生长因子释放以及支架的溶胀度、孔径、孔隙率等物理性能。3.将负载HUCMSCs的NGF/Coll-H支架植入到兔喉返神经损伤模型中。通过电生理学、组织学、免疫组织化学、免疫荧光、Western Blotting等相关指标检测了负载HUCMSCs的NGF/Coll-H支架材料对兔喉返神经损伤的修复效果。 结果：单一酶消化法用0.1%Ⅱ型胶原酶进行消化分离，可获得高收率的种子细胞。该方法获得的细胞增殖快、传代可控、生物学性质稳定、纯度高，可为组织工程提供理想的种子细胞。Coll-H的平均孔径为50-100μm，孔隙率为76%。该支架具有良好的吸水性能和热稳定性。而且通过细胞活性测试和体外降解实验，可以得知该支架具有良好的细胞相容性和生物可降解性。NGF释放实验结果表明，NGF/Coll-H复合支架具有长期、持续的NGF释放能力。动物实验证实，该复合支架可明显促进喉返神经功能的恢复。 结论：负载HUCMSCs和NGF缓释功能的Coll-H复合支架，吸收培养液或组织液后可形成有利于干细胞自身生长、分化和修复神经损伤的微环境，结合干细胞、NGF构建具有活性功能的神经组织工程材料，为有效治疗外周神经损伤提供了具体方案。该创新研究结果为临床治疗喉返神经损伤提供了理论依据。