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目的1、研究GRK6在大鼠急性脊髓损伤(SCI)模型中的表达变化,探讨它在脊髓损伤和修复过程中的生物学功能。2、研究GRK6在LPS诱导小胶质细胞活化过程中的表达变化,探讨其在小胶质细胞活化过程中的潜在作用。方法1、72只平均体重为250g(220-275g)雄性SD大鼠被用于本实验研究中,其中48只用于蛋白印迹分析,24只用于免疫组织化学染色和免疫荧光双标染色。按改良Allen’s法制作T9节段脊髓撞击损伤模型,通过蛋白印迹分析、免疫组织化学和免疫荧光染色等方法观察GRK6在急性脊髓损伤后的表达变化、组织分布与细胞定位,在此基础上探讨GRK6在小胶质细胞活化过程中的潜在作用。2、我们在离体水平建立了LPS诱导小胶质细胞活化的模型。利用蛋白印迹分析的方法观察小胶质细胞活化过程中GRK6和F4/80表达变化,分析其在小胶质细胞活化过程中的作用。结果1、蛋白印迹分析实验检测发现GRK6蛋白表达水平在急性脊髓损伤后呈显著上调趋势。2、免疫组织化学染色分析发现在正常脊髓中GRK6是广泛分布的,损伤后3d, GRK6的高表达主要在神经元和胶质细胞内。统计分析发现与假手术组相比,损伤后3d, GRK6阳性细胞的数量在脊髓白质内显著增加。3、运用免疫荧光双标技术,结果发现GRK6主要定位于神经元和小胶质细胞。统计分析显示在损伤后3d, GRK6与CD11b标记的小胶质细胞共定位明显增加,而与NeuN标记的神经元共定位没有明显的变化。4、蛋白印迹分析和免疫荧光双标技术显示F4/80的表达在损伤后3d达高峰,并且GRK6与F4/80标记的小胶质细胞存在共定位。此外,为了排除血液中移行至损伤处的巨噬细胞,实验结果显示GRK6的高表达在与CD68标记的小胶质细胞有共定位,且损伤3d后共定位明显增加。5、通过建立体外LPS诱导小胶质细胞活化的模型发现在HAPI小胶质细胞内GRK6的表达上调存在LPS刺激时间和剂量的依赖性,并且,F4/80的表达变化与GRK6一致。结论GRK6可能涉及到脊髓损伤后小胶质细胞的活化过程。