iNOS在EGCG促A549细胞凋亡中的作用

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目的:目前研究显示表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤活性。但是尚不清楚对炎症的作用和其作用机理,本实验选择人肺腺癌上皮细胞株A549细胞,观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对A549细胞的增殖、凋亡和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白和mRNA表达的影响。方法:体外培养和扩增A549细胞,选择对数生长期的细胞,随机分为对照组和EGCG处理组。MTT方法检测EGCG对A549增殖活性的影响、并筛选最显著作用浓度;应用流式细胞仪检测最强作用浓度的EGCG孵育对A549细胞凋亡作用;应用免疫酶组化染色法、蛋白质印迹定量分析法与Real time-PCR方法检测EGCG组中iNOS蛋白和mRNA的表达情况,对比分析作用其特点。实验结果:结果显示,与对照组相比,在50-400mg/L浓度范围内EGCG可以显著抑制A549细胞的增殖活性,其中200mg/L的EGCG抑制作用最强;其差异具有显著性(F=1000.35,q=3.43-60.00,P<0.05)。EGCG处理可以显著提高A549细胞的早期和晚期凋亡率,尤其晚期凋亡和总凋亡百分比率增加更明显,与对照组比较有差异显著性(x2=65.23,P<0.05)。与对照组比较,EGCG抑制iNOS蛋白与mRNA的表达,其表达量较对照组显著降低。其差异有显著性(t=9.4,p<0.05)、(t=5.7,p<0.05)。并可见EGCG促进A549细胞的胞质和胞核固缩、体积变小,这些固缩的小的A549细胞中iNOS蛋白表达呈增高状态。实验结论:EGCG抑制A549细胞的增殖、促进其凋亡作用可能与下调iNOS蛋白与mRNA的表达量有关。
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