离子束介导玉米DNA转化水稻生物学效应研究

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低能离子对细胞表面的刻蚀和溅射作用为外源DNA的进入提供了通道,同时离子注入又对宿主细胞的DNA产生一定的损伤,这就可以实现外源DNA在受体细胞中的转导。为了研究离子束介导玉米DNA转入普通水稻的生物学效应,我们通过离子束介导的方法,将玉米基因组DNA大片段导入水稻获得转化后代,并从以下四个方面对T3、T4和T5代突变株进行研究: 1.运用统计学方法分析T3、T4代变异后代的多项形态指标。2.制作有丝分裂中期染色体装片,对T5代进行核型分析,从染色体水平上分析染色体畸变。3运用蛋白质的SDS-PAGE电泳、复性电泳技术分析T5代全蛋白组和过氧化物酶(POD)的酶谱变化。4.克隆T5代中外源性类黄酮3-0-糖苷转移酶基因(uf3gt)外显子2序列,连入载体,转化并测序,初步证实了外源DNA片段的转入。 结果表明:1.离子束介导的转化后代表型突变谱广。T3、T4代株高、叶型、千粒重、穗长、籽粒形态、可育率的变幅很大,呈近正态分布;同时极端表型丰富。整体表现为:株高增加;叶片变大;千粒重、穗长、籽粒大小和可育率呈现先减小再回复增加的趋势。2.T5代染色体相对长度和臂长比发生了较大变化。总体表现出第一、二、三号染色体相对长度增加,而第七至十二号染色体相对长度减小的规律;不同突变株的染色体臂长比与对照差异明显,主要集中在第二、五和十一号染色体。3.T5代不同器官全蛋白组SDS—PAGE条带表达量与对照存在差异。POD酶带数目和活性也发生了明显变化,其中茎和叶鞘出现了多条新的酶带。4.从T5代突变株中克隆到了外源性类黄酮3-0-糖苷转移酶基因(uf3gt)的外显子2序列,经测序,与DNA供体玉米的该序列一致,初步验证了该外源片段的转入和稳定传代。 此研究为进一步深入探讨离子束的生物学效应和转化机制提供了理论依据。
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