维药阿里红对运动疲劳小鼠Th1/Th2免疫平衡及共刺激因子干预研究

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目的:研究运动疲劳小鼠IFN-γ、IL-4、IL-10及TNF-α等细胞因子表达变化,分析IFN-γ/IL-4平衡动态变化特征及B7-1、B7-2基因、蛋白表达水平,进一步了解运动性免疫抑制发生的机制,发现延缓运动疲劳发生以及维持机体运动疲劳后免疫平衡的方法。方法:健康昆明种小鼠,♂,适应性饲养3d后,随机分为5组,每组10只,分别为正常对照组、模型对照组、维药阿里红水煎剂组。小鼠进行渐增负荷跑台训练。每次运动后实验组分别人工灌胃灌注0.2mL低浓度维药阿里红、中浓度维药阿里红、高浓度维药阿里红稀释液,给药剂量分别为20、40、80mg/100g体重。末次运动后即刻,处死小鼠并取材。结果:(1)小鼠体重监测:与M组比较,各实验组小鼠体重均高于M组,其中E1、E2组与M组比较具有显著性差异(P<0.05),E3组与M组比较存在非常显著差异(P<0.01);(2)小鼠脾脏指数及胸腺指数:实验组小鼠脾重、胸腺重量及脾脏指数、胸腺指数与M组比较出现上升趋势,其中E1组与M组比较无显著差异(P>0.05),E2、E3组与M组比较均具有显著差异(P<0.05);(3)力竭跑台运动实验:C组小鼠力竭跑台运动时间与M组、E1组比较出现显著上升(P<0.05);E2、E3组小鼠与M组比较,力竭运动时间出现显著上升(P<0.05);(4)血乳酸、血睾酮水平:M组小鼠血乳酸水平显著高于C组(P<0.01)及各实验组(P<0.05);与C组比较,各实验组小鼠血乳酸水平出现显著上升(P<0.05);M组及E1组小鼠血清睾酮水平较C组呈现显著上升状态(P<0.01);E2组及E3组显著低于M组(P<0.01),E1组与M组比较不存在显著性差异;(5)血清心肌酶水平:M组小鼠血清心肌酶(AST、LDH、CK)水平显著低于C组(P<0.01),实验组AST较M组出现极显著下降(P<0.01),E1组LDH低于M组,但不存在显著差异(P>0.05),E2、E3组显著低于M组,各实验组CK与M组比较显著降低,其中E1组与M组比较存在显著差异(P<0.05),E2、E3组与M组比较存在极显著差异(P<0.01)。(6)ELISA检测免疫细胞因子水平:M组小鼠血清INF-γ、TNF-α较C组出现显著下降(P<0.01),与M组比较,E1组小鼠IL-4水平显著下降(P<0.05),E1组小鼠血清IL-10细胞表达与M组比较无显著性差异(P>0.05);E2、E3组小鼠IL-4和IL-10细胞与M组相比出现显著降低(P<0.05),E2组小鼠血清INF-γ、TNF-α较M组出现显著上升(P<0.01),且显著低于C组(P<0.05);E3组INF-γ显著高于M组(P<0.01),TNF-α显著高于M组(P<0.05),且E3组小鼠INF-γ、TNF-α水平显著低于C组(P<0.05)。(7)Real-time PCR检测mRNA表达:维药阿里红干预作用下,E2组IL-4 mRNA与M组比较存在显著性差异(P<0.05),E1、E2组较M组出现下降趋势,但均不存在显著差异(P>0.05);E3组IL-10mRNA较M组显著下降(P<0.05),E1、E2组较M组出现下降现象,但不存在显著差异(P>0.05);维药阿里红各剂量组INF-γ、TNF-αmRNA与M组比较均出现显著上升(P<0.05)。(8)Western-blot检测B7-1、B7-2蛋白表达:M组小鼠脾脏B7-1蛋白表达较C组出现显著上升(P<0.01),各实验组较M组出现下降趋势,其中E1、E2组与M组比较存在显著差异(P<0.05),E3组与M组比较存在极显著下降(P<0.01)。说明维药阿里红干预可显著下降运动疲劳小鼠脾脏B7-1蛋白表达。结论:(1)维药阿里红水煎剂可有效促进运动疲劳小鼠生长速率,提高小鼠胸腺指数、脾脏指数及有氧运动能力,同时降低运动疲劳小鼠BLA、T及血清心肌酶(AST、LDH、CK)水平。(2)维药阿里红水煎剂可有效纠正小鼠运动免疫抑制状态,下调血清Th2细胞因子(IL-4、IL-10)水平及脾脏IL-4、IL-10 mRNA表达水平,并显著上调血清Th1细胞因子(INF-γ、TNF-α)水平及脾脏INF-γ、TNF-αmRNA表达水平,平衡机体Th1/Th2免疫平衡。同时下调运动疲劳小鼠脾脏B7-1及B7-2蛋白表达水平。
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