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作为甜味植物,甜叶菊和甜茶叶中含有大量的甜菊糖苷，例如stevioside、rebaudioside C、rebaudioside A和rubusoside。这些甜菊糖苷类物质具有高甜度、低热能特性，适用于糖尿病患者、肥胖症患者和动脉粥样硬化病人的饮食中。因此，甜菊糖苷逐渐成为研究的热点。目前甜菊糖苷已作为甜味剂，用于食品、药品等领域。本文主要对甜叶菊中的主要甜味物质，以及甜茶叶中的主要甜味物质进行分离与纯化研究：确定两种植物中甜味物质的提取方案；利用大孔吸附树脂对两种植物中的甜味物质进行分离；利用制备型高效液相色谱分别对两种植物的粗提物进行纯化；最后，对甜菊糖苷的生物转化进行了初步探索。1.首先确定了甜叶菊中甜菊糖苷的检测方法，即利用HILIC色谱柱对其进行分析与定量。确定了甜茶叶中rubusoside的检测方法，即利用C18色谱柱进行分析与定量。2.确定了从甜叶菊中提取stevioside、 rebaudioside A和rebaudioside C的条件为：固液比1:10，温度100℃，提取时间60min，提取三次，提取率为97.23%。确定大孔吸附树脂分离stevioside、rebaudioside A和rebaudioside C的最佳分离工艺条件：选用HP-20树脂，上样浓度为水提三次的原料液（浓度约为6mg/mL），上样流速4BV/h，上样量13BV，去离子水洗3BV，用70%乙醇在3BV/h条件下洗脱产品。经过HP-20初步分离之后，用D941阴离子交换树脂进行脱色，水洗得到粗提物。叶片中甜菊糖苷含量为8.21%，将100g甜叶菊叶片按照上述最优工艺提取。再利用HP-20树脂分离纯化，可得到14.25g纯度为48.9%的粗提物，经过D941之后，可以得到10.39g的纯度为63.7%的粗提物，树脂纯化的收率为83.0%。利用HILIC制备柱，从甜叶菊（Stevia rebaudiana Bertoni）粗提物中纯化得到三种单体：stevioside、rebaudioside C和rebaudioside A。纯化条件如下:色谱柱Venusil HILIC制备柱(21.2×250mm,5μm100)，流动相V乙腈:V水=83:17，流速10mL/min，检测波长213nm。结果显示，最大上样量可达200mg，此时得到79.2mg的stevioside、7.4mg的rebaudiosideC和33.7mg的rebaudioside A，纯度分别为：97.5%，96.8%和97.2%。3.从甜茶叶中提取rubusoside的工艺：同上，提取收率为97.44%。得到大孔吸附树脂分离rubusoside的工艺为：上样液浓度为水提三次的原料液（浓度约为2mg/mL），上样流速3BV/h，上样量13BV；在3BV/h条件下，先用3BV去离子水洗杂质，后用3BV的30%乙醇洗脱杂质，然后用90%乙醇洗脱产品。再用D941树脂进行脱色。叶片中甜茶甙含量为4.5%，将100g甜茶叶按照上述最优工艺提取，再利用HP-20树脂分离纯化，可得到7.31g纯度为52.1%的粗提物，经过D941树脂，可以得到5.22g纯度为68.6%的甜茶甙粗品，树脂纯化的收率为82%。利用C18制备柱，从甜茶叶（Rubus suavissimus S. Lee)粗提物中纯化rubusoside。确定的工艺条件为：反相C18色谱柱（19×300mm,7μm, Waters)，流动相V_甲醇:V_水=75:25，流速10mL/min，检测波长213nm。上样量为200mg，依然可以达到良好的分离，从而得到123.4mg纯度为97.9%的甜茶甙单体。4.鉴于stevioside有后苦味，rubusoside口感较佳，且甜茶叶的产量较低，因此本文还对stevioside转化为rubusoside的菌株进行了筛选，从而获得了一株霉菌，用于转化。得到的转化培养基，经过HP-20树脂纯化后，得到的转化产物中甜菊糖苷含量为75.44%，且所含rubusoside、stevioside、rebaudioside C和rebaudioside A的相对含量分别为：43.8%,20.4%,7.9%和27.9%。而最初底物所含rubusoside、stevioside、rebaudioside C和rebaudioside A的相对含量分别为0、66.72%、11.28%、22%。因此甜叶菊提取物经过转化后得到的产品stevioside相对含量降低，rubusoside和rebaudioside A相对含量升高，所以后苦味降低，甜度加强，从而改善了产品的甜度。